苏木、滇重楼、丁香对牙菌斑生物膜影响的体外研究

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[目的]在前期研究苏木、滇重楼、丁香对浮游状态下的单种致龋菌生长代谢影响的基础上,进一步观察这三种药物对牙菌斑生物膜的影响,探求其在龋病防治方面具有的潜在价值。[方法]利用人工口腔在体外构建牙菌斑生物膜,分别使用苏木、滇重楼、丁香的粗提物对生物膜进行干预,(1)采用实时荧光定量PCR法观察牙菌斑生物膜中细菌生长状况;(2)采用扫描电子显微镜观察牙菌斑生物膜表面形态的形成和变化;(3)采用激光共聚焦扫描显微镜结合荧光染色技术观察牙菌斑生物膜的厚度和生物膜活性,探讨苏木、滇重楼、丁香对牙菌斑生物膜中细菌的生长、生物膜结构和活性的影响。[结果](1)苏木、滇重楼、丁香粗提物对牙菌斑生物膜中细菌生长的影响:①6h时,与对照组相比,苏木能抑制牙菌斑生物膜中变异链球菌(S. mutans),血链球菌(S. sanguis),嗜酸乳杆菌(L.acidophilus),粘性放线菌(A.viscosus)的生长(P<0.05);滇重楼能抑制S. mutans、 L.acidophilus的生长(P<0.05);丁香能抑制S. mutans的生长(P<0.05);两两比较发现,苏木对L.acidophilus生长的抑制作用强于滇重楼和丁香(P<0.05)。②24h与48h时,与对照组相比,苏木能抑制S. mutans,S. sanguis,L.acidophilus,A.viscosus的生长(P<0.05):滇重楼能抑制S. mutans,L. acidophilus,A.viscosus的生长(P<0.05);丁香能抑制S. mutans,L. acidophilus的生长(P<0.05);两两比较发现,苏木对S.mutans, A.viscosus生长的抑制作用强于滇重楼和丁香(P<0.05)。③72h时,与对照组相比,苏木、滇重楼均能抑制S. mutans,S. sanguis,L.acidophilus,A.viscosus的生长(P<0.05);丁香能抑制S. mutans,S. sanguis,L.acidophilus的生长(P<0.05);两两比较发现,苏木对S. mutans,A.viscosus生长的抑制强于滇重楼和丁香(P<0.05)。(2)苏木、滇重楼、丁香粗提物对牙菌斑生物膜表面形态的影响:①6h时,对照组的羟基磷灰石(HA)表面见大量散在或少量集聚成群的细菌,细菌间间隙较小;苏木组的HA表面仅见少量的细菌分布,细菌间间隙很大;滇重楼组的HA表面可见散在或集聚成群的细菌,细菌间间隙较对照组大;丁香组的HA表面见散在分布的细菌,细菌间间隙较大。②24h时,四组HA表面的细菌数量均较6h时增多。对照组的HA见带孔状养料通道的不规则膜状结构;苏木组的HA表面无膜状结构形成;滇重楼组的HA表面细菌数量和集聚增加,无膜状结构形成;丁香组的HA表面见散在和集聚的细菌,无膜状结构形成。③48h时,对照组的HA表面见整齐、规则、致密的立体膜状结构,见谷穗状结构;苏木组的HA表面见不规则的立体膜状结构,少量谷穗状结构。滇重楼组的HA表面见少量带孔状养料通道的不规则膜状结构,无明显立体膜状结构形成。丁香组的HA表面见不及对照组整齐、规则立体膜状结构,少量谷穗状结构。④72h时:除对照组的HA表面细菌相互交织成立体网状结构,其余组均未见立体网状结构。苏木组的HA表面见片状膜,见孔状养料通道;滇重楼组的HA表面片状膜结构的孔状养料通道较少;丁香组的HA表面的片状膜较苏木组致密,见孔状养料通道。(3)苏木、滇重楼、丁香粗提物对牙菌斑生物膜厚度和活性的影响:牙菌斑生物膜的厚度介于5.76-19.26μm之间;6h、24h、48h、72h时,与对照组相比,苏木、滇重楼、丁香对牙菌斑生物膜厚度均有明显减少作用(P<0.05),苏木厚度减少作用强于滇重楼和丁香(P<0.05);6h、24h、48h、72h时,与对照组相比,苏木、滇重楼、丁香对牙菌斑生物膜活性均有明显降低作用(P<0.05),苏木活性降低作用强于滇重楼和丁香(P<0.05):[结论]苏木对牙菌斑生物膜中S. mutans, L.acidophilus, S. sanguis, A.viscosus生长均有抑制作用;滇重楼对S. mutans, L.acidophilus, A.viscosus的生长有抑制作用;丁香对S. mutans, L.acidophilus的生长有抑制作用;其中,苏木的抑制作用强于滇重楼和丁香。苏木、滇重楼、丁香均能抑制牙菌斑生物膜正常表面形态的形成,其中滇重楼的抑制作用强于苏木和丁香;苏木对生物膜的厚度和活性的抑制作用强于滇重楼和丁香。苏木和滇重楼在龋病防治中的作用及机制值得进一步深入研究。
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