金属硫蛋白(Metallothionein, MT),是一类低分子量、富含半胱氨酸、无芳香族氨基酸、能与金属结合的普遍存在于生物界的非常独特的蛋白质。具有重金属解毒、清除自由基、抗辐射、修复组织损伤、抗衰老以及调节微量元素平衡等重要作用。现有MT主要来自于动物内脏的提取物,存在重金属污染的可能,使之不能成为有效的医药蛋白资源,而其MT蛋白体外原核表达研究也不深入。因此,本论文选用河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)为材料,采用基因重组技术,对其MT在大肠杆菌中的表达进行了较为系统的比较与分析,建立了MT的体外原核表达系统,筛选获得了有效表达MT的菌株,探索了用不同表达载体表达华溪蟹MT。为研究重组MT为抗原制备多克隆抗体,以及在蛋白水平探讨MT的组织分布和细胞定位奠定了基础,为MT在环境监测及环境污染治理方面的应用开辟了途径。首先,在克隆得到河南华溪蟹MT的cDNA,将华溪蟹MTcDNA连接于T载体上得到pGEM-T-MT的基础上,将其导入大肠杆菌DH5α中,以pGEM-T-MT质粒为模板,PCR扩增目的片段,双酶切,胶回收纯化,连接至pGEM-T载体扩增,双酶切,亚克隆至pQE31载体,转入大肠杆菌BL21中。结果表明,PCR扩增目的片段产物大小符合要求,重组质粒pQE31-MT双酶切鉴定与其一致,测序结果正确。其次,在将河南华溪蟹MTcDNA连接于pQE31载体上得到pQE31-MT的基础上,将其导入大肠杆菌DH5α中,以pQE31-MT质粒为模板,PCR扩增目的片段,双酶切,胶回收纯化,连接至pGEM-T载体扩增,双酶切,亚克隆至pGEX-6p-1载体,转入大肠杆菌BL21中。结果表明,PCR扩增目的片段产物大小符合要求,重组质粒pGEX-6p1-MT双酶切鉴定与其一致。从IPTG浓度、IPTG诱导时间、金属离子浓度等几个方面摸索诱导MT表达的条件,表达出分子量约为35kD的融合蛋白。