目的探讨蜘蛛香总环烯醚萜抗抑郁作用及基于肠道菌群-血脑屏障途径的作用机制。方法1.采用孤养加慢性不可预知温和应激(CUMS)方法建立小鼠抑郁模型,小鼠持续造模4周后,观察小鼠活动状态,记录小鼠体重变化。通过行为学实验(糖水消耗实验、悬尾实验)判断造模是否成功。分别灌胃给药蜘蛛香总环烯醚萜(TIV)低、中、高(5.7 mg/kg/d、11.4 mg/kg/d、22.8 mg/kg/d)剂量混悬液,及氟西汀(2.6 mg/kg/d)溶液,连续给药2周,通过糖水消耗实验、悬尾实验验证TIV的抗抑郁作用。2.采用伊文思蓝(EB)染色法检测血脑屏障通透性变化,通过透射电镜观察血脑屏障紧密连接超微结构变化,最后用Western blot法检测小鼠大脑皮层紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin蛋白的表达。3.使使16S r RNA扩增子测序分析技术检测分析小鼠肠道菌群,采用Tax4Fun预测出的KEGG代谢通路三层级结果,探究CUMS模型小鼠肠道菌群结构、功能变化以及TIV对抑郁小鼠肠道菌群-血脑屏障途径的作用。结果1.造模4周后,与正常组比较,模型组、氟西汀组、TIV-低、中、高剂量组小鼠的悬尾不动时间显著延长(P<0.01),糖水消耗率显著降低(P<0.01),体重显著降低(P<0.01),表明采用CUMS的方法成功复制小鼠抑郁模型。给药2周后,与模型组相比,氟西汀组和TIV-中、高剂量组小鼠悬尾不动时间明显缩短(P<0.01使P<0.05),氟西汀组和TIV-低、高剂量组糖水消耗率明显升高(P<0.01使P<0.05);2.EB染色后,与正常组比较,模型组脑内EB含量显著升高(P<0.01);与模型组相比,TIV-高剂量组脑内EB含量明显降低(P<0.05)。通过透射电镜观察小鼠血脑屏障紧密连接的超微结构,正常组血脑屏障在六个组中结构形态最为完整。相比之下,模型组血脑屏障紧密连接明显受损,基底膜较薄,部分区域出现断裂。而氟西汀组以及TIV-低、中、高剂量组内皮细胞大致正常,基底膜断裂情况较模型组有一定的改善。Western blot法检测血脑屏障紧密连接相关蛋白的表达,与正常组相比,模型组小鼠脑组织ZO-1蛋白和Occludin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),与模型组相比,氟西汀组,TIV-低、中、高剂量组ZO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01),此外,与模型组相比,氟西汀组,TIV-中、高剂量组Occludin蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。3.通过16S r RNA测序分析,各组小鼠肠道菌群在多样性和丰富度上存在变化,有一定差异趋势,但不具有统计学意义;采用Tax4Fun预测出的KEGG代谢通路三层级结果,显示小鼠代谢、遗传信息处理、环境信息处理、细胞进程、生物体系统和人类疾病功能均产生变化。通过对结果进行分析可知,TIV可能通过调节肠道菌群产生的短链脂肪酸等物质,影响小鼠血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达水平,从而影响血脑屏障的功能结构。结论TIV抗抑郁的作用机制,可能和其调节模型动物异常的肠道菌群,改善血脑屏障的通透性有关。