伪狂犬病(Pesudorabies,PR)是对养猪业造成严重性破坏的重要疫病之一。此病对断奶后的仔猪、育肥猪、母猪造成明显神经性症状、不育、木乃伊胎等一系列严重疾病。近期疱疹病毒编码的miRNA的研究表明,一些疱疹病毒编码的miRNA参与病毒复制过程,甚至在病毒的调节过程中起着关键的作用。而目前对于伪狂犬病毒编码的miRNA来说,相关的研究甚少。本研究旨在研究伪狂犬病毒编码的miRNA血清表达谱及其在疫苗免疫与感染鉴别诊断中的应用。抽取不同生长阶段猪的血清,分别混合不同生长阶段疫苗免疫猪的血清和免疫后感染猪的血清。用血清RNA提取试剂盒提取总RNA,利用RT-PCR和实时荧光定量比较集中不同血清样本伪狂犬病毒编码的miRNA表达谱,利用生物信息学的方法分析伪狂犬病毒编码的miRNA对自身的调控以及感染病毒后对宿主miRNA表达谱的影响。本研究根据在感染伪狂犬病毒的血清和免疫的血清中miRNA表达量的差异,做出了关于伪狂犬病毒miRNA的血清表达谱。同时,比较分析了不同血清样本中的miRNA表达谱的差异显著性,筛选验证出能够作为分子标志的miRN A。此外还详细的分析了在疫苗免疫与感染后miRNA表达谱的改变作为一种鉴别诊断的可能性。我们根据文献中验证的miRNA,挑选出37条伪狂犬病毒编码的miRNA,合成他们的引物,研究伪狂犬病毒编码的miRNA对疫苗免疫猪和疫苗免疫后感染猪miRNA相对表达量的潜在作用,以及筛选出能够应用于疫苗免疫与感染鉴别诊断的miRNA。本研究挑选文献中基于JS-2012株的研究最新发现伪狂犬病毒编码的37条m iRNA,并对其进行实时荧光定量PCR,根据引物特异性强筛选出的10条miRN A表达谱如下:4条miRNA上调,6条miRNA下调。这些miRNA的表达差异可能在病毒的复制中起着尤为重要的作用。我们的结果表明miRNA在疫苗免疫后感染PRV后会有表达量的变化,这对于进一步研究miRNA的功能具有重要意义。通过对疫苗免疫组与感染组的血清表达谱对比,分析miRNA-5作为疫苗免疫与感染鉴别诊断的分子标志可能性,研究表明miRNA-5可以作为鉴定疫苗免疫与感染的分子标志,以后也将会有更多的关于伪狂犬病毒编码miRNA的研究。近几年的研究都证明了伪狂犬病毒可以编码miRNA,并且这些miRNA也可以与宿主相互作用。疫苗免疫与感染鉴别诊断中,根据两种不同的血清表现出的miRNA表达谱差异,在分子层面上作为一种分子标识来鉴别疫苗免疫猪与感染猪,本实验在筛选出来的miRNA能作为鉴别免疫猪与免疫感染猪标志物的可能性上进行了深入的研究。结果表明miRNA-5可以用来鉴定免疫猪与免疫后感染猪。