硒是人体必需的微量元素,是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的重要组成部分,缺硒会造成GPX活性较低,从而导致各种疾病。因此安全有效的补硒剂的研究与开发是当前研究的重要课题之一。硒的存在形式有无机硒和有机硒两种,但无机硒毒性较大,而有机硒在安全性、生物活性及生物利用度等方面都优于无机硒。葛根(Radix puerariae),又称为葛条、甘葛、葛藤,系豆科(Legum inosae)多年生藤本植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)或甘葛藤(Pueraria thom soniiBenth)的干燥根,属药食两用植物,具有防治心脑血管病疾病、降血脂、预防骨质疏松等多种生物活性。目前国内外未见对葛根的富硒研究,也未见富硒葛根中微量元素硒的形态和分布的研究报道。本文对葛根的富硒及硒的赋存形式及分布进行了系统研究,为葛根有机硒保健食品或药物的研究开发提供科学依据。主要研究内容如下:　　 1、研究了施硒方式和浓度对葛根富硒效果的影响。采用叶面施硒和土壤施硒两种方式对葛根进行了富硒田间试验,选用氢化物原子荧光光谱测定葛根中的硒含量。结果表明叶面施硒富硒效果好,最佳亚硒酸钠浓度为20 mg／L。原子荧光光谱测定硒含量最佳实验条件为灯电流80 mA、负高压280 V、载流盐酸浓度10％、硼氢化钠浓度0.9％、酸介质浓度2.4 mol／L。该法线性范围为1～10 ng／mL,检出限为0.003 ng／mL,精密度为2.54％～4.17％(n=10),湿法消解和微波消解的平均回收率分别为95.69％和98.37％,皆可用于葛根的消解,本文样品的消解处理选用湿法消解。氢化物原子荧光测定原葛根、叶面喷施(20 mg／L,亚硒酸钠溶液)和土壤喷施(40 mg／L亚硒酸钠溶液)葛根中总硒含量分别为0.0527±0.0052,0.2086±0.0205和0.0644±0.0045μg／g,其RSD分别为2.67％,3.21％和2.72％。可见,叶面喷施富硒效果较好。　　 2、研究了富硒葛根中硒的主要赋存形态及分布。富硒葛根中有机硒的含量为0.1719μg／g,占总硒的82.42％。有机硒主要由蛋白硒、多糖硒和核酸硒组成,按照结合硒量的多少,硒分布顺序依次为多糖硒>蛋白硒>核酸硒。其中多糖硒和蛋白硒是富硒葛根中的主要赋存形式,其结合的硒分别占富硒葛根中有机硒的41.59％和37.23％,总硒的34.76％和30.68％。硒在蛋白中分布为碱溶性蛋白>水溶性蛋白>盐溶性蛋白>醇溶性蛋白,葛根中碱溶性硒蛋白、水溶性硒蛋白、盐浴性硒蛋白和醇溶性硒蛋白中硒含量分别占可溶性硒蛋白的45.00％、37.19％、12.65％和5.00％,占有机硒的16.75％、13.84％、4.71％和1.88％,占总硒的13.81％、11.40％、3.86％和1.54％。　　 3、研究了富硒葛根硒多糖的分离纯化,结构及硒含量。富硒葛根粗多糖的得率为9.16％,粗多糖中多糖含量为42.33％。分离纯化后的富硒葛根多糖经高效液相色谱检测,峰形对称,说明纯化效果较好。计算得各多糖组分RP-SeP-1、RP-SeP-2和RP-SeP-3的硒含量分别为0.9562μg／g,0.6113μg／g和0.3827μg／g.,分子量分别为3507,19638,和97949。RP-SeP-1由葡萄糖组成；RP-SeP-2由木糖和葡萄糖组成,其摩尔比为木糖:葡萄糖=1:3.56；RP-SeP-3由半乳糖,甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比为半乳糖:甘露糖:葡萄糖=1:1.27:9.85。　　 4、研究了富硒葛根硒蛋白的分离纯化,测定了硒蛋白组分的硒含量及亚基组成。采用不同溶剂提取得到四种富硒葛根硒蛋白,运用DEAE-52纤维素和Sephadex G-100对富硒葛根水溶性蛋白和碱溶性蛋白进行分离纯化,各得2个硒蛋白组分,未变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)鉴定其纯度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定富硒葛根硒蛋白组分亚基的分子量。得到富硒葛根水溶性粗蛋白得率和含量分别为3.35％和14.65％,占总硒量的11.40％；盐溶性粗蛋白得率和含量分别为0.37％和10.34％,占总硒量的3.86％；醇溶性粗蛋白得率和含量分别为0.39％和12.14％,占总硒量的1.54％；碱溶性粗提物得率和含量分别为10.33％和18.89％,占总硒量的13.81％；富硒葛根粗蛋白中蛋白含量高低为碱溶性蛋白>水溶性蛋白>盐溶性蛋白>醇溶性蛋白。富硒葛根蛋白组分采用非变性凝胶电泳检测得到单一的电泳带,说明纯化效果较好。用SDS-PAGE法测定其亚基的分子量,经过计算得到纯化后富硒葛根水溶性蛋白由分子量为43.0kDa、29.0 kDa和17.8 kDa三个亚基组成,富硒葛根碱溶蛋白由43.0 kDa和26.3kDa两个亚基组成。硒蛋白RP-SePA.22和RP-SePG-22硒含量分别为3.175μg／g和4.328μg／g。