【摘 要】
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用筛选到的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌疫苗株甲醛灭活后,选用合适的佐剂制备乳腺炎三联苗,经过理化性质鉴定、无菌检验和安全检验。对小鼠免疫三次后采血,用全菌
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用筛选到的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌疫苗株甲醛灭活后,选用合适的佐剂制备乳腺炎三联苗,经过理化性质鉴定、无菌检验和安全检验。对小鼠免疫三次后采血,用全菌包被ELISA试验检测鼠血清抗体,结果表明采用油佐剂制成的奶牛乳腺炎三联苗物理性状稳定能有效激发小鼠产生抗金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的血清抗体。为评价奶牛乳腺炎三联油乳剂灭活疫苗防制奶牛乳腺炎的效果,我们进行了疫苗接种田间试验。为评价疫苗免疫效果建立了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌菌体包被酶标板检测血清抗体效价的间接ELISA检测方法。在对试验奶牛三次免疫后检测牛血清抗体效价。结果发现免疫组血清抗体效价与对照组相比有明显提高。免疫乳清体外抑菌试验的结果表明乳清中较高的特异性抗体确实能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌的生长。提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768bp的开放读码框(Open reading frame, ORF),可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比,第8位Tyr→Cys,第95位Pro→Ser,第126位Thr→Ala的3个氨基酸发生了点突变,同源性为98.4%。成功构建原核表达载体pET32a+/ cfb,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为48kD,表达量占菌体总蛋白的52.7%。这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。
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