论文部分内容阅读
胰腺导管腺癌发病隐匿,发病率较高,确诊时多为晚期,临床治疗预后较差。胰腺导管腺癌的发生受多种因素影响,可能与患者不健康的生活方式,基因突变,记忆沉默,基因表达失控,细胞信号传导紊乱等因素有关。虽然已经开展了一些诊断或预测胰腺导管腺癌的指标,但特异性和敏感度较差。探索并发现一些新的能够预测胰腺导管腺癌患者临床预后的生物标记物分子可以有助于更好地为临床治疗提供更多重要信息。IncRNA通常是由基因组转录而来,绝大部分不能翻译,长度多于200nt的RNA分子,在哺乳动物基因组中种类含量较多。随着大量的深入研究,IncRNA的有了一定的了解,其参与机体的生理功能、调控基因表达,染色质修饰等多种调控过程。与正常组织相比,一些研究发现某些IncRNA表达水平在肿瘤组织中会发生根本性的变化,其可能作为肿瘤标记物用于诊断治疗或预后预测。另外有研究表明IncRNA可能在肿瘤的生长过程中作为抑癌基因或影响抑癌基因,减少细胞凋亡,促进肿瘤增殖。IncRNA也被发现在肿瘤的转移中发挥重要作用。有研究表明IncRNA参与了调控编码蛋白基因,为治疗癌症开辟新的思路。某些IncRNA在胰腺癌中特异性表达。一些研究表明TMED11P是一种IncRNAs,其在某种程度上参与了胰腺导管腺癌的发病。本课题首先在细胞水平上对TMED11P的功能进行初步研究,证实在PNAC-1、MIA-PACA-2、AsPc-1、BxPc-3四种细胞中TMED11P的相对表达量有差别。通过瞬时转染,分别构建了 TMED11P基因表达上调和下调的细胞。TMED11P基因表达量与细胞增殖水平呈现反比关系。TMED11P基因表达量降低,细胞增殖水平上升;TMED11P基因表达量增加,细胞增殖水平受到抑制;经对比分析下调表达TMED11P基因的细胞增殖水平与上调表达TMED11P基因的细胞增殖水平有显著性差异(P<0.05)。TMED11P基因下调能够增强MIA PACA-2和ASPC-1细胞的愈合能力。TMED11P基因表达上升能够削弱MIA PACA-2和ASPC-1细胞的愈合能力。与下调表达TMED11P基因的细胞愈合能力相比,上调表达TMED11P基因的细胞愈合能力明显受到抑制,差异显著(P<0.05)。与对照组比较,TMED11P基因上调表达后,MIA PACA-2和ASPC-1细胞侵袭能力受到明显抑制(P<0.05),而TMED11P基因下调后细胞侵袭能力明显增强(P<0.05)。为了更好的确认TMED11P基因在的功能,选用MIA PACA-2和ASPC-1细胞构建了稳定上调和下调表达TMED11P基因的细胞株,在动物体内进一步验证了TMED11P基因调控MIA PACA-2和ASPC-1细胞的增殖情况,同时研究了 TMED11P基因表达水平与吉西他滨药物的治疗效果的关系。分别成功构建了 2株稳定上调表达和2株稳定下调表达TMED11P基因的细胞株,即ASPC-1/HiRNA,MIA PACA-2/HiRNA,ASPC-1/SiRNA,MIA PACA-2/SiRNA。在稳转细胞株上再次证实TMED11P基因的表达量不同,影响胰腺癌细胞的增殖能力。即TMED11P基因表达上调,胰腺癌细胞的增殖能力受到抑制。TMED11P基因表达下降,胰腺癌细胞的增殖能力增强。胰腺癌细胞组TMED11P的表达量上升,药物半数有效抑制浓度降低;TMED11P的表达量降低,药物半数有效抑制浓度升高。在体外使用吉西他滨处理后,与对照组相比,TMED11P高表达的胰腺癌细胞早期凋亡比例和晚期凋亡比例上升(P<0.05);TMED11P低表达的胰腺癌细胞早期凋亡比例和晚期凋亡比例降低(P<0.05)。TMED11P表达量不同的胰腺癌细胞在接种后肿瘤大小有差别,TMED11P低表达组肿瘤较大。在裸鼠上研究了吉西他滨治疗TMED11P表达量不同胰腺癌细胞的增殖情况,与对照组相比,接种TMED11P高表达组细胞的肿瘤较小,治疗效果较好;接种TMED11P低表达组的胰腺癌细胞形成肿瘤较大,治疗效果较差。研究了吉西他滨治疗TMED11P表达量不同的胰腺癌细胞对裸鼠体重情况,肝肾功能和血细胞的影响,结果表明,与未治疗组相比,高表达TMED11P治疗组的体重增长明显增加(p<0.05)。分析对比三组未治疗组之间的体重数据,结果可知低表达TMED11P未治疗组体重增加最少,高表达TMED11P未治疗体重增加稍多。分析三组治疗组的体重增加,低表达TMED11P治疗组体重增加最少,高表达TMED11P治疗组体重增加较多。与未治疗组相比,治疗组的ALT,AST,BUN,Cre检测结果显著降低(p<0.05),肝肾功能明显改善。与未治疗组相比,治疗组的RBC,WBC,Lymph检测结果显著降低(p<0.05)。为了进一步研究TMED11P与胰腺导管腺癌细胞的关系,及TMED11P作为分子标志物在诊断胰腺导管腺癌细胞的意义,本研究筛选出57例胰腺导管腺癌患者实施了进一步的研究。研究表明胰腺导管腺癌组织中TMED11P的相对表达量与癌旁组织有显著性差异(p<0.05)。通过分析胰腺导管腺癌患者的淋巴结转移情况,原发肿瘤情况,远端转移情况等临床信息,并与TMED11P在肿瘤组织表达情况进行相关性分析,结果表明TMED11P表达量与患者的存活时间,肿瘤大小和淋巴结转移情况也有一定的相关性(p<0.05)。TMED11P高表达组的中位生存时间较长,TMED11P低表达组的中位生存时间较短,两组之间有显著差异(P<0.05)。TMED11P的表达量与患者的生存时间呈现出正相关的关系,肿瘤组织中TMED11P的表达与患者的预后有一定的相关性。单因素分析表明原发肿瘤情况,直径大小,TMED11P表达量,组织分化程度,TNM分期,淋巴结转移,远处转移情况与患者存活时间具有一定的相互关系。多因素风险回归分析结果表明TMED11P的表达量,肿瘤直径大小,肿瘤细胞组织分化程度可能与患者治疗预后效果有一定的关联性。上述研究结果表明TMED11P可能是胰腺导管腺癌发生发展中的一个预后预测标志物,可以与其它指标结合更好的用于胰腺导管腺癌患者预后评估,也可以为医生选择较好的治疗方案做参考。TMED11P可能在未来作为一个治疗靶点选择,与药物联合应用,更好的为临床服务。