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背景:针对于肝脏疾病发病机制的探讨及筛选合适护肝药物的研究中,建立稳定的动物模型是必不可少的手段。但现有的动物模型存在不足之处,因此,建立更稳定的急性肝损伤动物模型具有重要的现实意义。目的:1.应用甜蜜素建立稳定急性肝损伤动物模型;2.探讨甜蜜素致急性肝脏、心脏、肾脏损伤可能作用机制。方法:将小鼠随机分为空白组及甜蜜素低、中、高剂量组,每组24只,空白组予0.9%生理盐水以0.04ml/g/d腹腔注射,甜蜜素低、中、高剂量组分别以3000mg/kg/d、6000mg/kg/d、12000mg/kg/d甜蜜素腹腔注射,每24小时给药一次,第1、3、5、7天末采血及取肝脏、心脏、肾脏标本一次,检测血清谷丙转氨酶(Alanine Aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、总胆红素(Total Bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct Bilirubin,DBIL)、肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT)、血清肌酐(Serum Creatinine,Scr)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)的水平;肉眼观察肝脏、心脏、肾脏组织改变及HE染色变化;电镜下观察肝脏超微结构改变;酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫组化法检测肝脏、心脏、肾脏组织肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果:1.血清学结果:(1)与平行空白组相比,第1、3天末低剂量组ALT水平上升(P<0.05),第1、3天末中、高剂量组,第5天末各模型组及第7天末低、中剂量组ALT水平明显上升(P<0.01),第1天末中、高剂量组,第3、5天末各模型组及第7天末低、中剂量组AST水平明显上升(P<0.01);与该组第1天末相比,低剂量组第5、7天末,中剂量组第3、5、7天末及高剂量组第3、5天末ALT水平明显上升(P<0.01),低、中剂量组第3、5、7天末及高剂量组第3、5天末AST水平明显上升(P<0.01)。各模型组ALT、AST水平与甜蜜素剂量及给药时间呈极强正相关(P<0.01,r=0.83~0.97)。各组TBIL、DBIL水平无明显差异(P>0.05)。(2)与平行空白组相比,第1天末高剂量组及第7天末低剂量组CK、CK-MB水平上升(P<0.05),第3、5天末高剂量组及第7天末中剂量组CK、CK-MB水平明显上升(P<0.01),第1天末高剂量组cTnT水平上升(P<0.05),第3、5天末高剂量组及第7天末低、中剂量组cTnT水平明显上升(P<0.01);与该组第1天末相比,低、中剂量组第7天末及高剂量组第3、5天末CK、CK-MB、cTnT水平明显上升(P<0.01)。(3)各组Scr、BUN水平无明显差异(P>0.05)。2.光镜下观察:(1)各模型组表现出不同程度的肝细胞排列紊乱、气球样变性、炎性细胞浸润、肝窦淤血扩张。且随着甜蜜素剂量增大、给药时间增加,肝细胞破坏加重。(2)低、中剂量组第5天末个别肌纤维出现极少量变性,低、中剂量组第7天末及高剂量组第1、3、5天末整条肌束出现不同程度的颗粒样变性和水样变性。(3)低、中剂量组第5天末及高剂量组第1天末个别肾小管管腔扩张,低、中剂量组第7天末及高剂量组第3、5天末肾小管上皮细胞出现不同程度的刷状缘脱落、坏死,肾小管管腔扩张、基底膜裸露。3.电镜下观察:空白组小鼠肝细胞各细胞器未见明显异常,中剂量组第5天末肝细胞内线粒体、内质网、核糖体、染色质明显受损。4.ELISA结果:在第5天末,相较于空白组,低、中、高剂量组肝脏组织TNF-α及IL-1β水平明显升高(P<0.01);高剂量组小鼠心脏组织TNF-α及IL-1β水平明显升高(P<0.01);中剂量组小鼠肾脏组织IL-1β水平升高(P<0.05),高剂量组小鼠肾脏组织TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.01)。5.免疫组化结果:在第5天末,相较于空白组,肝脏组织TNF-α及IL-1β蛋白在低剂量组表达升高(P<0.05),中、高剂量组表达明显升高(P<0.01);心脏组织TNF-α及IL-1β蛋白在高剂量组表达升高(P<0.05);肾脏组织TNF-α蛋白在高剂量组表达升高(P<0.05),IL-1β蛋白在中剂量组表达升高(P<0.05),高剂量组表达明显升高(P<0.01)。结论:1.应用甜蜜素6000mg/kg/d连续腹腔注射5天可成功建立小鼠急性肝损伤模型。2.甜蜜素对肝脏损伤显示出毒性量-效、时-效关系。3.甜蜜素致急性肝脏、心脏、肾脏损伤发病机制可能与TNF-α、IL-1β介导的炎症反应相关。