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目的:
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种主要发生于结肠和直肠黏膜或黏膜下层的、边界不清楚的炎性反应,属于炎症性肠病(IBD)的一种。其病因及发病机制目前尚不清楚,免疫系统异常是造成炎症和组织损伤的内在因素,并与遗传、环境、微生物等因素密切相关。转化生子因子(TGF-β)是一种多功能的细胞因子,表现在创伤修复、免疫调节、细胞凋亡等多个方面,与自身免疫等多种疾病的发生发展有着密切的关系,TGF-β作为一种抗炎细胞因子在肠道免疫平衡中发挥着重要的作用[1]。TGF-β信号传递主要通过Smads信号传导通路发挥调控机制[2]。近年来研究发现,血管生成在炎性肠病中具有十分重要的意义。与血管形成有关的因素有许多,其中血管内皮生长因子是影响血管生成非常有效和特异的因子。VEGF不仅能促进血管内皮细胞分裂增殖,而且能促进微静脉和小静脉的通透性增加,与IBD的发生有着密切的关系[3]。VEGF信号传递主要通过MAPK信号传导通路发挥作用。本实验通过观察复方青黛颗粒对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎大鼠结肠组织转化生长因子-β1(TGF-β1)与血管内皮生长因子(VEGF)表达,进一步探讨复方青黛颗粒治疗溃疡性结肠炎大鼠的相关机制。
方法:
实验分组:将52只体质量250±20g,雄性SD大鼠,随机分为6组,空白对照组,模型对照组,复方青黛颗粒低(0.6g/kg)、中(0.9g/kg)、高(1.2g/kg)剂量组及柳氮磺吡啶(0.5g/kg)组。
实验方法:用TNBS法制备溃疡性结肠炎大鼠模型。造模后第三天开始灌胃给药(灌胃药物剂量均按照大鼠与人之间药物剂量换算公式计算)。给药共10天,实验第14天处死大鼠,取大鼠病变结肠组织1.0cm×1.0am放入EP管中,置于-80℃冰箱保存备用。剩余部分用4%甲醛溶液固定待用。
指标检测:应用苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理形态学变化;RT-PCR方法检测TGF-β1及VEGF的mRNA表达;免疫组化SP法检测TGF-β1蛋白表达。
结果:
光镜病理形态学观察(HE染色):溃疡性结肠炎模型复制成功,UC模型组可见粘膜缺损,侵及粘膜层与粘膜下层,固有层有大量炎性细胞,以中性粒细胞为主浸润,并可见淋巴细胞等,组织坏死明显。
结肠组织TGF-β1、VEGF基因表达和TGF-β1蛋白测定:空白对照组中TGF-β1及VEGF表达与模型对照组比较显著升高,复方青黛颗粒高剂量组中TGF-β1基因与蛋白的表达较模型对照组显著下降。复方青黛颗粒高剂量组中VEGF基因表达较模型组显著升高。
结论:
1、复方青黛颗粒能有效缓解TNBS诱导的UC模型大鼠结肠黏膜组织的充血水肿,促进溃疡面愈合,改善结肠组织学损伤,并呈剂量依赖性。
2、复方青黛颗粒治疗溃疡性结肠炎的作用可能与抑制结肠组织中TGF-β1表达,促进VEGF表达有关。