禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病。近两年来,禽流感频繁爆发肆虐全球,给我国乃至世界上许多国家的养禽业造成了极大的经济损失。H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)是一株低致病性禽流感病毒,具有高度变异性和易与其他亚型流感病毒发生重组等特点,往往会造成毒力增强,甚至跨物种传播造成人际间的流感爆发或大流行。2013年我国爆发的禽流感病毒H7N9亚型和H10N8亚型均是由H9N2病毒与其他亚型流感病毒重组而产生的。因此,寻找有效的抗流感病毒的靶标及药物已迫在眉睫。禽流感病毒的致病性一方面取决于病毒的特征,另一方面取决于宿主免疫应答。树突状细胞(Dendritic cells,DC)是免疫应答过程中最重要的抗原递呈细胞,也是沟通天然免疫和获得性免疫的唯一桥梁,参与抵御流感病毒的复制。miRNA是一类具有调节功能的RNA,广泛参与调控树突状细胞的发育、成熟以及抗原递呈功能等。尤其是,近年的研究发现miRNA参与调控树突状细胞以应对流感病毒的攻击。因此,从miRNA的层面入手去探讨miRNA调控树突状细胞的功能具有重要的理论和实践意义,也为合理的开发新型miRNA药物以及应用miRNA预防禽流感病毒提供了重要的理论依据。在禽流感病毒中,结构蛋白NA、M和NS在病毒传播中发挥着重要的功能,其中神经氨酸酶(NA)具有切割病毒颗粒与细胞唾液酸的连接以及释放子代病毒的功能。因此本研究从三个结构蛋白(NA、M、NS)入手,首先,构建这三个结构蛋白的真核表达载体,转染树突状细胞,结果显示NA可以显著刺激树突状细胞的MHCII和CD80表型的高表达,表明NA具有刺激树突状细胞的成熟的功能。其次,我们通过荧光定量PCR筛选受上述三个结构蛋白影响的miRNA,结果表明NA能显著上调树突状细胞的miR-155和miR-674(其中miR155上调4.67倍,miR-674上调2.12倍)。再次,针对差异表达的miRNA,本研究通过过表达和干扰的方法分别研究miR-155和miR-674对树突状细胞免疫功能的影响。最后,为了进一步探讨miRNA的可能作用机制,我们通过miRNA靶基因预测软件分别筛选miR-155和miR-674的潜在靶基因,通过双荧光素酶法验证miRNA与靶基因之间的相互作用。试验结果表明,miR-155能够显著降低MYO1D基因的荧光素酶活性,荧光抑制率达到58.2%;而对于miR-674,CAMK1D和MBNL3均能造成荧光素酶活性显著差异,CAMK1D为85.2%、MBNL3 甚至达到了 90.5%。综上,本研究成功构建了从NA到miRNA以及其下游靶基因的调控网络(NA-miR155-MYOID,NA-miR674-CAMK1D,NA-miR674-MBNL3),为揭示 miRNA在宿主与病原相互作用中潜在的重要作用奠定基础。