红细胞膜收缩蛋白作为正己烷周围神经毒效应替代标志物的研究

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目的 研究正己烷周围神经毒效应与红细胞膜收缩蛋白(又叫血影蛋白,spectrin,Sp)共价交联的关系.方法 SD大鼠正己烷灌胃,分0、168、675、2700 mg/kg四组,5d/周、连续8周,观察动物体重、脏器指数(心、肝、脾、肺、肾、脑和睾丸)、生化指标(谷草转氨酶、谷丙转氨酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、总胆红素、直接胆红素、碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶、尿素氮、肌酐、尿酸、葡萄糖、乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶、磷酸肌酸激酶同工酶、羟丁酸脱氢酶、总胆汁酸、胆碱酯酶)、混合神经传导速度(mixed nerves conduction velocity,MNCV)和斜板法测肌力功能,光、电镜观察胫神经.双缩脲法测抽提的红细胞膜蛋白浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后银染,光密度扫描计算蛋白含量,用Western blot鉴定Sp.结果 染毒8周后,2700mg/kg组动物后肢瘫痪、瘫痪率为80%,体重减轻、MNCV减慢、肌力下降(P<0.05),主要生化指标未见明显变化,肾、心、肝、肺、脑指数明显上升(P<0.05),胫神经光镜下表现为轴索数目稀疏、髓鞘变薄,电镜下轴索大小不一、部分肿胀、神经丝密度增加、部分髓鞘回缩.红细胞膜蛋白浓度为:5.88±0.89g/L,电泳后银染见240kD条带之上有异常条带,经Western blot证实为Sp共价交联产物,带形为连续"拖尾"状.共价交联部分占总Sp的百分比呈时间-剂量-效应关系.结论 正己烷2700mg/kg连续灌胃8周,可复制出致周围神经毒性动物模型,出现后肢瘫痪和周围神经轴索病变.并可引起Sp共价交联,其作为正己烷周围神经毒性效应替代标志物具有可行性,但仍需深入研究.
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