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目的:探讨辅助降糖片改善细胞胰岛素抵抗可能的作用机制,鉴定辅助降糖片的化学成分,利用网络药理学预测其改善胰岛素抵抗的相关作用靶点,为辅助降糖片改善胰岛素抵抗提供科学依据。方法:高分辨液质联用方法对辅助降糖片进行初步化学成分分析;网络药理学预测其可能的降糖作用靶点;高浓度胰岛素诱导HepG2细胞、棕榈酸诱导C2C12使其产生胰岛素抵抗,CCK-8法检测辅助降糖片对HepG2细胞、C2C12细胞活性的影响筛选合适的药物浓度并用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法(GOD-POD法)测定各组HepG2细胞、C2C12细胞的葡萄糖消耗量;Annexin V-FITC/PI双染法,检测造模方法和辅助降糖片对HepG2细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号转导通路中InsRβTyr1135/1136、PI3Kp85等mRNA的表达;Western Blot法检测该通路中InsRβTyr1135/1136、IRS1、等关键蛋白在HepG2细胞、C2C12细胞中的表达水平。结果:1.辅助降糖片化学成分分析:通过对比化合物对照品的的质谱裂解规律和结合参考文献及数据库质谱裂解信息,本实验快速鉴定出化合物37个。黄酮类化合物17个,其中包括黄酮苷类9个,皂苷类8个,酚酸类9个,其他类3个,初步的分析了辅助降糖片中化学成分。2.网络药理学结果:18个化合物预测的靶点通路与IR疾病基因相关的通路有5条,与IR相关的靶点有312个,其中与PI3K/AKT胰岛素信号通路相关的蛋白有4个。3.辅助降糖片对胰岛素抵抗肝细胞(HepG2)的作用:1)GOD-POD法测定葡萄糖含量:辅助降糖片不同浓度可不同程度的提高HepG2细胞葡萄糖消耗量(P<0.05或P<0.01)。2)Annexin V-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡率:造模方法加上选取的药物浓度对各组HepG2细胞凋亡无影响。3)实时荧光定量PCR检测:与正常组相比模型组InsRβTyr1135/1136、PI3Kp85、AKT、GLUT4 mRNA的表达显著降低(P<0.01),与模型组相比,实验组能上调InsRβTyr1135/1136、PI3Kp85、AKT、GLUT4mRNA的表达(P<0.01或P<0.05)。4)Western Blot法检测:与正常组相比模型组InsRβTyr1135/1136、IRS1、PI3Kp85、PDKI、AKT、GLUT4及其磷酸化水平显著降低(P<0.01),p-GSK-3β的表达显著降低(P<0.01),与模型组相比,实验组能上调p-InsRβ Tyr1135/1136、p-IRS1 Try895、p-PDK1 Ser241、p-AKT Thr308、p-GSK3β蛋白磷酸化水平(P<0.01或P<0.05)。4.辅助降糖片对胰岛素抵抗肌细胞(C2C12)的作用:1)肌细胞胰岛素抵抗模型的建立:含2%马血清的高糖培养基诱导7天后C2C12细胞分化为成熟的肌细胞,用0.5mM棕榈酸建立了 C2C12细胞稳定的胰岛素抵抗模型。2)GOD-POD法测定葡萄糖含量:辅助降糖片不同浓度可不同程度的提高C2C12细胞葡萄糖消耗量(P<0.05或P<0.01)。3)Western Blot法检测蛋白:与正常组相比模型组p-InsRβTyr1135/1136、p-AKT Thr308、p-PDK11Ser241、PI3Kp85、GLUT4、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01)、与模型组相比,实验组能上调p-InsRβTyr1135/1136、p-AKT Thr308、p-PDK1 Ser241、PI3Kp85、GLUT4、p-GSK-3β蛋白的表达水平(P<0.01或P<0.05)。结论:1.快速鉴定出37个化合物,并用网络药理学预测了辅助降糖片与胰岛素抵抗相关的靶点。2.辅助降糖片能促进胰岛素抵抗的肝细胞、肌细胞对葡萄糖的消耗,改善胰岛素抵抗,其机制可能通过上调胰岛素PI3K/AKT信号通路中的关键基因如InsRβTyr1135/1136、PI3Kp85、AKT、GLUT4基因的表达,上调p-GSK-3β及PI3Kp85的表达和InsRβ Tyr1135/1136、IRS1、PDK1、AKT及其磷酸化水平。