农药混用在农业生产上极为普遍,传统研究及相关标准只针对单一药剂对环境进行风险评估,往往低估混合农药的潜在威胁。为揭示混合农药在土壤中富集机制和毒理效应,本研究以海南省豇豆上防治病虫害主要使用的3种农药阿维菌素、吡虫啉和多菌灵作为研究对象,分析其混合施用后在土壤中的富集降解规律,复合污染条件下对土壤指示生物——蚯蚓的急性毒性、氧化胁迫毒性及回避毒性,为3种农药在海南混合安全使用提供理论依据和技术指导,主要研究结果如下:1、优化测定3种农药在土壤中残留量的液相色谱方法。仪器检测方法为检测器:PDA检测器;色谱柱:C18（4.6×250 mm）不锈钢柱;柱温:30℃;流速:1.0 m L/min;波长:245 nm;进样量:10μL;梯度洗脱程序。前处理方法为土壤震荡法提取3次。采用该方法测定3种农药在土壤中的平均回收率在80%～104%之间,日内RSD值在2.8%～12.5%之间,日间RSD值在1.9%～4.1%之间,均符合农药残留试验准则要求。2、通过上述方法对农药残留动态田间试验土壤样品进行检测,获得3种农药混合喷施后在土壤中的降解和富集情况。阿维菌素、吡虫啉和多菌灵在土壤中的降解半衰期分别为6.93、4.81和4.01 d,均属于易降解农药。降解动态研究发现,随着农药施用数量的增加,农药在土壤中的降解半衰期均比单一施用时延长,阿维菌素、吡虫啉和多菌灵同时施用时降解速率最慢,降解半衰期分别为10.19、7.79和6.30 d。阿维菌素、吡虫啉和多菌灵单独施用和混合施用三次后7 d在土壤中的残留量分别为0.154、0.223、4.328 mg/kg及0.187、0.287、5.775 mg/kg。随着施药次数的增多,农药在土壤中产生富集现象,残留量随着施药次数及农药数量的增加显著增加。3、分别采用滤纸接触法和人工土壤法研究3种农药单剂及其混剂对赤子爱胜蚓（Eisenia fetida）急性毒性。结果表明,滤纸接触法测定阿维菌素、吡虫啉和多菌灵对蚯蚓48 h-LC50值分别为8.89×10-3、5.56×10-5、>10 mg/cm~2,毒性大小顺序为吡虫啉>阿维菌素>多菌灵。人工土壤法分析结果表明,阿维菌素、吡虫啉和多菌灵对蚯蚓14 d-LC50值分别为26.81、3.18、8.48 mg/kg dw,毒性大小顺序为吡虫啉>多菌灵>阿维菌素。参照OECD和国标（GBT21809-2008）标准,阿维菌素、吡虫啉和多菌灵对蚯蚓的毒性等级为低毒、中毒和中毒。两种方法的结果都显示出随着农药数量的增多,对蚯蚓的毒性成倍增强的现象。4、采用相加指数法和联合指数法对混剂相互作用进行评估。真实值与两种评估曲线大多重合,表明两种评估方法准确度较高。采用相加指数法评估发现除滤纸接触法中阿维菌素+吡虫啉处理组48 h为协同作用,其他处理组均为相加作用。联合指数法评估发现,滤纸接触法中阿维菌素+吡虫啉处理组于24 h即为协同作用;人工土壤法中7 d时所有混剂组合都表现出拮抗作用,14 d时吡虫啉+多菌灵处理组仍然表现拮抗作用,阿维菌素+吡虫啉和阿维菌素+多菌灵处理组表现出相加作用,三元混剂阿维菌素+吡虫啉+多菌灵处理组表现出协同作用。联合指数法可以更快速、更精细的评估联合毒性。5、采用超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性变化研究阿维菌素、吡虫啉和多菌灵单剂及混剂对蚯蚓体内抗氧化酶活的影响。结果表明,当蚯蚓受到阿维菌素、吡虫啉和多菌灵胁迫时,体内SOD活性显著提高,于21 d达到峰值,28 d显著降低但仍高于对照,混合农药胁迫下SOD活性较单剂更早提高且28 d时高于单剂,与浓度呈现正相关。随时间的延长,蚯蚓体内CAT活性显著提高,其中吡虫啉处理组7 d时CAT降低,14 d时显著提高。CAT活性与农药浓度不具有相关性。6、采用两室型回避反应装置测定蚯蚓对阿维菌素、吡虫啉、多菌灵单剂及其混剂的回避行为。结果表明,所有处理在设定浓度梯度内均产生回避效应,阿维菌素、吡虫啉和多菌灵对蚯蚓48 h-AC50值分别为0.28、0.03、0.05 mg/kg dw,敏感性大小为吡虫啉>多菌灵>阿维菌素,随着农药数量的增多,土壤条件愈发不适应蚯蚓生存,蚯蚓更易产生回避行为。回避行为结果AC50较急性毒性结果LC50低两个数量级,且蚯蚓对农药回避趋势与急性毒性结果相似,说明回避反应可以更加快速、准确的反应农药在环境中危害情况。本研究为3种农药的残留限量标准修订及在田间合理安全使用提供理论支持。