我国是心脑血管疾病大国,每年因心脑血管疾病死亡的人数多达几百万,心脑血管疾病的根源在于血栓堵塞,所以对心脑血管疾病的研究应主要针对溶栓,目前市场上的溶栓药物主要是急救药物,本课题是针对一种具有高溶栓功效、无毒无副作用、用于预防和治疗心脑血管疾病的溶栓药物的研究。重组纤溶酶QK（简称QK）是一种从天然菌株Bacillus subtili QK分泌表达的新型纤溶酶,QK基因序列与纳豆激酶的基因序列有高度相似性,能直接高效降解纤维蛋白即高纤溶活性,基于QK的天然性,副作用小安全性强,QK用作血栓溶解药物治疗心脑血管疾病有很好的开发潜力和应用前景。本研究第二章通过对纤溶酶QK溶栓机理和药效学两个方面进行了研究,结果分为以下4个部分:1、Western-Blot法检测QK对胰蛋白酶是否有一定的抗性,结果证明QK对胰蛋白酶有抗性,所以在后续口服灌胃QK实验中,可以避免QK在经过消化道时被蛋白酶降解,不会影响QK溶栓功能的发挥;2、外翻肠囊离体吸收模型的制备即模拟体内肠环境,通过测蛋白浓度验证QK在小肠中不同的肠段（十二指肠、空肠、回肠）的吸收情况,对QK含量的测定发现QK在十二指肠段吸收较多,回肠段吸收量第二,空肠段吸收量最低,吸收量随时间推移是逐渐增加的,但不同肠段的吸收值排名不变。QK在通过小肠后用纤维平板法测定QK酶的活性,与未经小肠的QK进行对比,发现活性并无明显区别,均具有活性;3、离体吸收实验观察了QK的溶栓作用后,接下来采用药效学方法观察QK在大鼠体内的溶栓效果,对大鼠单次灌胃不同剂量的QK后,在给药前,给药后3h、6h、9h分别取血,用E-LISA法测量血浆中纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物（FDP）和D-二聚体的水平变化情况,结果表明QK灌胃给药后血浆中的D-二聚体和FDP浓度增加。D-二聚体和FDP的浓度与灌胃QK的初始活性呈剂量依赖关系,并且D-二聚体和FDP的浓度随时间推移（从3小时至9小时）浓度也增加。已经证明了QK在大鼠中具有溶栓作用,同时希望揭示QK在健康人体中的作用,对20名年轻和20名老年参与者分组进行了研究,在给药前和单次口服不同剂量的QK后8小时静脉采血,临床上通常监测D-二聚体水平来反映纤维蛋白溶解功能。结果是年轻参与者口服QK8小时后D-二聚体水平显著增加,但不同剂量组的年轻参与者D-二聚体水平的增加没有显著差异。在老年参与者中,与安慰剂组相比,口服5000 IU的QK对D-二聚体水平没有影响,但口服10,000 IU或20,000 IU的QK显著增加了D-二聚体水平。此外,QK剂量和D-二聚体水平的增加在老年参与者中具有剂量-效应关系;4、本研究建立了基于皮下注射角叉菜胶导致尾部血栓形成的小鼠模型,然后灌胃不同剂量的QK进行治疗。QK处理过的尾部血栓长度在缩短,此外尾部血栓减少程度与QK呈剂量依赖性,表明QK能显著抑制尾部血栓的形成,在体内能发挥相关溶栓作用。本研究第二章从体外和体内两方面阐明了QK具有高纤溶活性,为QK作为一种新型溶栓酶药物的开发奠定了基础,可以作为临床使用的口服溶栓剂的候选药物之一。本研究第三章关于Survivin基因,是一种凋亡蛋白（IAP）抑制剂,在包括乳腺癌在内的广泛肿瘤中过度表达。考虑到其在正常组织和癌组织之间的分化表达,它已成为乳腺癌早期检测和预后的有吸引力的分子,但目前尚未报道Survivin基因作为诊断肿瘤标志物的一个具体参考范围,希望建立一个关于该基因的定量检测方法,本研究第三章完成了对Survivin基因的标准品质粒的构建,可以用来在实时荧光定量反应中构建标准曲线,通过提取人血浆中总的RNA,以m RNA为模板,用逆转录酶反转录成为c DNA,再以c DNA为模板进行RT-PCR扩增反应合成目的基因,来获得Survivin基因表达的定量检测。