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目的研究JAK2/STAT3信号通路对人肺腺癌细胞A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF表达的影响。为进一步探索非小细胞肺癌血管生成机制提供依据。方法1.使用不同浓度AG490处理氧含量正常及缺氧条件下(CoCL2 200umol/L)A549细胞48小时后;Western blot法测定A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化。(分组详细情况如下:①为对照组;②组为AG490 50μmol/L;③组为AG490100μmol/L;④组为CoCL2诱导低氧组;⑤组为CoCL2+AG490 50μmol/L;⑥组为CoCL2+AG490 100μmol/L。)2.不同浓度AG490处理A549细胞48小时后;RT-PCR法检测A549细胞中HIF-1ɑmRNA、VEGF mRNA的表达变化。3.A549细胞转染STAT3siRNA后;Western blot法检测转染STAT3siRNA后A549细胞中STAT3、P-STAT3蛋白表达变化;RT-PCR检测转染STAT3siRNA后A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF mRNA的表达变化。4.IL-6活化JAK2/STAT3信号通路24小时后;Western blot法检测A549细胞中STAT3、P-STAT3、HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化;RT-PCR法检测A549细胞中HIF-1ɑ、VEGFmRNA表达变化。结果1.特异性JAK2抑制剂AG490作用于A549细胞48h后,与对照组进行比较,结果显示JAK2抑制剂AG490能够下调A549细胞株中HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,并呈现出浓度依赖性,随着AG490浓度的升高,对于HIF-1ɑ、VEGF蛋白的抑制作用更明显。CoCL2 200μmol/L条件下诱导的缺氧环境能够上调A549细胞株中的HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达。JAK2抑制剂AG490也能够下调CoCL2 200μmol/L诱导的A549细胞株中的HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达,并呈现出浓度依赖性,随着AG490浓度的升高,对于HIF-1ɑ、VEGF蛋白的抑制作用更显著。2.RT-PCR结果显示,使用不同浓度JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,A549细胞中的HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达与对照组(未经处理)相比均有下降,且随着AG490浓度的增高HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达与亲本细胞比较后逐渐下降。3.转染STAT3siRNA后的A549细胞,STAT3、P-STAT3蛋白水平及STAT3mRNA表达量显著下降,提示转染成功。在转染STAT3 siRNA成功后的A549细胞中RT-PCR结果显示,HIF-1α、VEGF mRNA表达水平明显受到抑制,表达量明显下调。4.IL-6(3.85nmol/L)处理A549细胞24h后,HIF-1ɑ与VEGF无论在蛋白表达水平上,还是在mRNA表达水平上,均表现为明显上调。然而,对于STAT3蛋白表达水平却无明显的影响。结论1.缺氧可上调A549细胞株中HIF-1α和VEGF蛋白表达。2.在A549细胞株中,JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF在蛋白及mRNA水平上的表达均具有调节作用。