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目的:NKG2D是介导NK细胞识别和溶解肿瘤细胞的主要活化型受体,表达于所有的NK细胞表面。NKG2D的配体在多种肿瘤细胞上表达,其在视网膜母细胞瘤的表达尚未见报道。本研究通过检测RB细胞上NKG2D配体的表达情况,及超声微泡介导P53基因转染RB细胞后NKG2D配体表达的变化,探讨抑制肿瘤途径中P53基因诱导肿瘤细胞凋亡和免疫细胞杀伤两者之间是否存在协同作用,为RB的免疫研究提供新思路。方法:1.以K562细胞为RB细胞的对照组,采用RT-PCR法检测RB、K562细胞表面NKG2D配体的表达情况。2.以Ficoll密度梯度离心法分离的外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞,RB和K562细胞作为靶细胞,MTT法检测NK细胞对RB、K562细胞的杀伤活性。3.以0.5W/cm2声强、辐照时间30s、连续波辐照超声微泡携带wtp53基因转染RB细胞。4.RT-PCR法检测转染基因组和空质粒组二组细胞表面NKG2D(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)配体的表达变化。5.流式细胞仪检测转染组与空质粒组RB细胞的凋亡情况。结果:1、K562细胞上表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3 ;RB细胞上表达NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2、ULBP3,不表达ULBP1。K562、RB细胞表面NKG2D的配体mRNA表达强度平均光密度比值K562细胞明显强于RB细胞(P<0.05)。MTT结果显示,在各效靶比时NK细胞对K562细胞的杀伤活性较RB细胞明显增强(P<0.05)。2、转染P53基因后,RB细胞上表达MICA、MICB、ULBP2,不表达ULBP1、ULBP3,且转染抑癌基因后NKG2D配体的表达较转染前明显下调(P<0.05)。转染P53基因后RB细胞凋亡增加。结论:1、NKG2D配体可在视网膜母细胞瘤细胞上表达。2、NK细胞对肿瘤的杀伤作用与肿瘤细胞表面NKG2D配体的表达水平有关, ULBP1和ULBP3可能在介导NK细胞杀伤中起着较为重要的作用。3、转染P53基因后抑制了RB细胞的生长,并在一定程度上下调了NKG2D配体的水平。说明抗肿瘤途径中P53基因诱导肿瘤凋亡与免疫细胞杀伤之间可能没有协同作用。