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复方抗焦虑胶囊为纯中药复方制剂,由蜘蛛香（Valerianae Jatamansi Rhizoma）、合欢皮（Albiziae Cortex）、炒酸枣仁（Ziziphi Spinosae Semen）和灯心草（Junci Medulla）组成,功能理气解郁、养心安神,临床观察及药理学实验均已证明有较强的抗焦虑作用。课题组前期已对该胶囊的质量标准、药效学作用机制以及安全性进行了较为系统的研究。然而,复方抗焦虑胶囊成分复杂,大部分成分目前未能准确定性;复方中有哪些成分能够被吸收入血,目前仍不清楚;该复方中主要效成分如橙皮苷、斯皮诺素在体内的代谢情况已有研究,但另一主要成分（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（简称丁香树脂酚糖苷,SAG）在体内的代谢和分布情况尚属空白。为了能从深层次阐明该复方中药制剂的药效物质基础,为研制生物利用度高、安全性好、疗效可靠的中药制剂提供依据,本课题采用超高效液相色谱串联飞行时间质谱方法（UPLC-Q-Tof-MS/MS）,对复方抗焦虑胶囊全方及缺方样品进行定性分析,为血清药物化学提供可靠的分析方法和完善的化合物数据库;优化入血成分的分析条件,并以UPLC-Q-Tof-MS/MS为检测手段,分析含药血清中的胶囊成分,最终确定复方抗焦虑胶囊的药效物质基础;采用超高效液相串联三重四级杆质谱技术（UPLC-TQ-MS/MS）,建立复方抗焦虑胶囊中主要药效成分SAG在生物样本中的含量测定方法,并对SAG及其苷元（-）-丁香树脂酚（SYR）在小鼠体内的药代动力学及体内过程进行了较为全面的研究。具体研究结果如下:1.采用UPLC-Q-Tof-MS/MS方法分析了复方抗焦虑胶囊化学成分。建立了稳定的UPLC-Q-Tof-MS/MS条件,分别在正负离子模式下对胶囊全方样品及缺味样品、大鼠胶囊含药血清进行分析,使得所有成分具有良好的分离度,优化质谱条件使得各成分裂解碎片稳定,裂解信息全面。并通过分析标准品的裂解行为,总结了胶囊中主要化学成分,尤其是双环氧木脂素类成分的质谱裂解规律。采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）模型,分析复方抗焦虑胶囊全方及缺味样品之间的差异,并对数据进行Pareto标度化处理,找出四味药材中对图谱差异影有显著响的成分峰。并根据二级质谱碎片及标准品裂解规律,以及缬草属、枣属、合欢属及灯心草属已报道的相关研究进行成分鉴定。共鉴定出在86个色谱峰,其中共鉴定了 46个化合物,大部分为缬草素类环烯醚萜、黄酮苷以及木脂素苷三大类成分,基本摸清了复方抗焦虑胶囊中非挥发性成分的化学信息,为分析给药后血清中的非挥发性化学成分打下了良好的基础。2.采用UPLC-Q-Tof-MS/MS方法分析了复方抗焦虑胶囊的入血成分建立了复方抗焦虑胶囊的大鼠含药血清制备方法:以6g/kg剂量复方抗焦虑胶囊连续灌胃三天,每天两次,最后一次灌胃1h后腹主动脉取血,静置过夜后取上清液2ml,3倍量甲醇沉淀蛋白,离心后室温下氮气吹干,残渣1.5ml甲醇复溶,涡旋后离心取上清液备用。通过UPLC-Q-Tof-MS/MS的血清药物化学分析,在给药后血清中共得到41个入血成分,鉴定了其中的17个成分,包括14个原型成分和3个代谢物。在已鉴定的这些成分中,很多化合物都被临床或动物实验验证,对焦虑症都存在着有效的治疗作用。为阐明复方抗焦虑胶囊的药效物质基础奠定了研究基础。2.采用UPLC-TQ-MS/MS方法分析了丁香树脂酚糖苷（SAG）在小鼠体内的代谢及分布规律。建立了以斯皮诺素为内标化合物的生物样品中SAG及其苷元SYR的UPLC-TQ-MS/MS测定方法:采用简单的甲醇沉淀方法对血浆样品、组织样品进行预处理,以乙腈-水溶液为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子化源（ESI）三重四极杆串联质谱,负离子模式,以多反应检测（MRM）方式进行检测,选择离子通道SAG m/z711→417,SYR m/z417→181,SPI m/z607→427。该方法专属性强、灵敏度高,准确度、精密度以及稳定性均可满足生物样本药物分析的要求,可以成功应用于SAG及SYR的小鼠体内的药代动力学研究。ICR雄性小鼠分别单次灌胃15、30、60mg/kg SAG后,采用UPLC-TQ-MS分析方法测定给药后不同时间点血浆中的SAG及SYR的浓度,绘制血药浓度时间曲线,采用winnolin 4.1软件,非房室模型计算药代动力学参数。结果表明,小鼠灌胃不同剂量的SAG后,SAG吸收较为迅速,快速分布,缓慢消除,消除半衰期（t1/2）低、中、高三个剂量分别为46.91、40.91、49.27min;达峰浓度Cmax低、中、高三个剂量分别为14.817、34.041、60.294 ng/mL;药时曲线下面积AUC低、中、高三个剂量分别为1069.485、2276.715、3697.1925min×ng/ml,AUC与给药剂量之间不成等比例增加关系,提示SAG在小鼠体内存在吸收饱和现象,呈非线性动力学特征。小鼠口服SAG后,一部分在体内迅速代谢成SYR,随后SYR药物浓度亦下降,下降至较低浓度后,开始以较缓慢的速度从体内消除,消除半衰期（t1/2）低、中、高三个剂量分别为46.91、45.91、50.27min,说明SYR在体内是恒比消除,半衰期为一定值,呈一级动力学消除过程。ICR雄性小鼠分别单次灌胃60mg/kg SAG后,采用LC-MS分析方法测定给药后不同时间点肝肾中的SAG及SYR的浓度,绘制血药浓度时间曲线,采用winnolin 4.1软件,非房室模型计算药代动力学参数。结果显示小鼠灌胃60mg/kg SAG后,药物分布结果为肝>肾,均小于血浆药物浓度。SAG组织亲和力不高。结论:本文通过UPLC-Q-Tof-MS/MS技术以及PCA,PLS-DA数据模型,分析、比较了复方抗焦虑胶囊全方样品和胶囊缺味样品,共鉴定出胶囊中86个色谱峰,其中共鉴定了 46个化合物;另外分析了胶囊含药血清中共得到41个入血成分,鉴定了其中的17个成分,包括14个原型成分和3个代谢物。以上信息为阐明复方抗焦虑胶囊的药效物质基础提供了研究基础。此外,本研究还对复方抗焦虑胶囊中主要药效成分（-）-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷及其苷元（-）-丁香树脂酚在小鼠体内的药代动力学及体内过程进行了较为全面的研究,填补了该成分体内代谢研究的空白。