目的：分析来氟米特活性代谢物A771726对角膜上皮的毒性，探讨局部应用该药物对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用，观察该药对体外诱导培养的大鼠骨髓来源树突状细胞分化成熟及免疫活性的影响，探讨其对角膜新生血管的抑制作用及机制。 方法： (一) 新西兰兔眼局部A771726滴眼，评价该药的眼部刺激性。制作兔角膜上皮缺损模型，局部滴用A771726和磷酸盐缓冲液(PBS液)，观察该药对兔角膜上皮增殖和移行的影响，并取角膜组织HE染色观察。 (二) 建立SD-Wistar大鼠同种异体穿透性角膜移植模型，随机分组后局部滴用生理盐水、不同浓度A771726及1.0％环孢霉素A，观察各组角膜植片情况，记录排斥指数(RI)、新生血管指数(NI)、植片存活时间，绘制植片生存曲线。对角膜植片进行HE染色观察，免疫组化染色观察角膜植片内IFN-γ、ICAM-1及颌下淋巴结MHC-Ⅱ、CD80表达情况。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测房水中IL-12及TNF-a含量。 (三) 体外定向诱导培养大鼠树突状细胞(DC)，分别加入不同浓度A771726培养6h后入脂多糖(LPS)刺激，倒置显微镜下观察DC形态，免疫荧光染色及流式细胞仪检测各组树突状细胞CD80、MHC-Ⅱ等表达情况，混合淋巴细胞增殖反应检测DC 激活同种异基因T淋巴细胞增殖能力，ELISA检测DC培养上清液中IL-12、TNF-a 含量。 (四) 碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型，随机分组后分别局部滴用生理盐水及不同浓度A771726，裂隙灯显微镜观察记录角膜新生血管的生长情况。不同浓度A771726与体外培养的人脐静脉内皮细胞共同孵育后，四唑盐比色法(MTT 法)检测细胞的增殖活性，免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。 结果： (一) 2.0％A771726滴眼组和对照组眼部刺激反应评分无显著差异。兔角膜上皮缺损制作后各时间点，2.0％A771726滴眼组角膜缺损区面积和对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，HE染色显示2.0％A771726滴眼组角膜上皮、基质及内皮未见损伤。 (二) 0.5％A771726滴眼组与空白对照组植片存活时间比较差异无统计学意义(P＞0.05)；1.0％、2.0％A771726滴眼组及1.0％环孢霉素A滴眼液组植片存活时间分别较空白对照组延长，差异有统计学意义(P＜0.01)；1.0％、2.0％A771726滴眼组及1.0％环孢霉素A滴眼液组植片存活时间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。术后10天空白对照组及0.5％A771726滴眼组角膜植片见大量炎症细胞浸润，新生血管生长，高表达IFN-γ及ICAM-1，颌下淋巴结高表达MHC-Ⅱ及CD80；术后20天1.0％、2.0％A771726滴眼组及1.0％环孢霉素A滴眼液组角膜植片见大量炎症细胞浸润，新生血管生长，高表达IFN-γ及ICAM-1，颌下淋巴结高表达MHC-Ⅱ及CD80。ELISA检测术后第4天各组大鼠房水IL-12及TNF-a 含量差异无统计学意义(P＞0.05)；术后8天空白对照组及0.5％A771726 滴眼组大鼠房水IL-12及TNF-a 含量显著增加，和其它组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)；术后16天，空白对照组及0.5％A771726滴眼组大鼠房水IL-12及TNF-a 含量下降，1.0％、2.0％A771726滴眼组及1.0％环孢霉素A滴眼液组房水IL-12及TNF-a 含量高于空白对照组及0.5％A771726 滴眼组，三组间两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。 (三) 经160μmol/L A771726 干预后，该组DC形态保持未成熟状态，CD80免疫荧光染色阳性率低。160μmol/L A771726 干预组DC表面MHC-Ⅱ、CD86单阳性表达率及MHC-ⅡCD86双阳性表达率、刺激反应细胞(T)增殖能力以及培养上清液中IL-12及TNF-a含量和阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，但均显著低于阳性对照组及80μmol/L A771726干预组，差异有统计学意义(P＜0.01)。 (四) 1.0％、2.0％A771726滴眼组大鼠角膜新生血管面积均小于空白对照组及0.5％A771726 滴眼组，差异有统计学意义(P＜0.01)，空白对照组与0.5％A771726 滴眼组大鼠角膜新生血管面积比较差异无统计学意义(P＞0.05)。40、80、160、320μmol/LA771726与人脐静脉内皮细胞共同孵育36 h 可抑制细胞增殖，随浓度增加抑制作用增强，免疫荧光染色显示细胞核PCNA的表达药物随浓度增加而降低。 结论：2.0％A771726滴眼液对兔角膜上皮无刺激性和毒性作用。局部应用A771726滴眼液能显著延长大鼠角膜移植植片存活时间，该药体外能抑制大鼠DC分化成熟，可能通过抑制树突状细胞分化成熟诱导受体对角膜植片形成免疫耐受。A771726 还能通过抑制血管内皮细胞增殖阻止角膜新生血管生成，间接抑制角膜移植排斥反应发生。