论文部分内容阅读
研究目的:衣原体是引起人类性传播疾病的主要病原体之一,女性泌尿生殖道衣原体感染会引发炎症性病变,从而导致包括输卵管积水、流产、异位妊娠在内的多种疾病[1,2,3]。糖原合成酶A（GlgA）是一种新的衣原体分泌蛋白,存在于衣原体包涵体内和宿主细胞的胞质中,GlgA与衣原体的生长和增殖密切相关,可能是衣原体诱导输卵管积水等病变的重要致病因子。本研究旨在探讨GlgA对衣原体致病性的影响,分析GlgA在衣原体诱导小鼠生殖道病变过程中的作用和作用机制,为衣原体感染的治疗和预防提供新的理论依据。研究方法:以6-8周的雌性BALB/C小鼠为实验对象,在小鼠阴道内分别接种纯化后的野生型鼠衣原体（WT）、无质粒型鼠衣原体（PF）及两种GlgA基因点突变致GlgA缺乏的鼠衣原体（P1D1、P2B10）,构建小鼠生殖道衣原体感染模型。在感染后的第3、7、10、14、21、28、35天,收集小鼠阴道脱落细胞中的鼠衣原体,接种到单层Hela细胞中,生长24h后,免疫荧光测定包涵体数量,分析不同鼠衣原体在小鼠生殖道的生长情况。在感染后第60天,分离完整的小鼠生殖道组织,评估其输卵管积水的严重程度,H&E染色后在显微镜下观察输卵管组织病变程度。在体外实验中,将不同的鼠衣原体分别接种于单层Hela细胞中,通过过碘酸-雪夫（PAS）染色比较上述不同鼠衣原体的糖原储存能力,同时进行再感染实验,分析各株衣原体体外感染能力的差异。设置平行实验,在小鼠阴道感染鼠衣原体后第10天将其处死,分离其完整的生殖道组织并分为三部分,包括卵巢-输卵管段（OV）、子宫-子宫角段（UH）和宫颈-阴道段（VC）,分别测定各段组织中的鼠衣原体含量,探究GlgA缺乏对鼠衣原体在小鼠生殖道的上行播散能力的影响,并收集小鼠卵巢-输卵管组织匀浆进行多因子分析,比较不同鼠衣原体感染后小鼠上生殖道炎性细胞因子的含量差异。研究结果:在小鼠生殖道感染模型中,与WT菌株相比,PF、P1D1和P2B10菌株所诱导的小鼠输卵管积水发生率和严重程度都显著降低;在显微镜下观察小鼠感染衣原体60天后的输卵管病理学变化,发现WT菌株感染会导致小鼠输卵管明显扩张,输卵管管腔明显变薄,多处组织出现纤维化改变,而PF和GlgA点突变的衣原体感染小鼠后,输卵管仅轻度扩张或无输卵管扩张。同时,野生鼠衣原体株感染后,小鼠输卵管组织中有明显的炎性细胞浸润,而质粒缺失或GlgA突变缺失后,鼠衣原体株仅能引起轻微的炎性反应,小鼠输卵管组织中无明显的炎性浸润病灶。此外,与WT相比,PF菌株感染后3、7、10、14天,小鼠阴道鼠衣原体脱落量明显降低,两种GlgA突变株在7、10、14天的脱落量均显著降低,且下生殖道感染持续时间均比野生株短。通过PAS染色法对衣原体包涵体内的糖原染色,可见野生鼠衣原体包涵体呈现深染的紫红色,糖原含量十分丰富。而GlgA缺失的衣原体包涵体内糖原含量均明显减少。在再感染实验中测定30h后的子代衣原体含量,PF、P1D1、P2B10子代包涵体数量均比WT明显减少。在平行实验中,与WT相比,PF、P1D1和P2B10在小鼠OV组织中含量显著减少,且VC组织中PF和P2B10的含量低于WT含量。组织匀浆多因子分析显示,PF感染后,几乎所有细胞因子均显著减少。与WT菌株相比,P1D1诱导的IL-12P40,IL-12P70,MIP-1β和IL-1α及P2B10诱导的IL-12P40,IL-12P70和MIP-1β均明显减少。研究结论:（1）在小鼠阴道感染后,GlgA缺乏的鼠衣原体诱导的小鼠输卵管积水程度及组织病变程度均明显减轻;GlgA缺乏的鼠衣原体感染小鼠后很快被机体免疫系统清除,无法在小鼠生殖道长期生长繁殖。（2）不同位点的GlgA基因点突变可在不同程度上降低鼠衣原体的糖原储存能力,且GlgA基因点突变后鼠衣原体传代受损,增殖能力减弱,在体外的感染性降低。（3）GlgA缺乏会抑制衣原体在小鼠生殖道的上行播散和组织中细胞因子的含量,使小鼠输卵管组织中的炎性反应减弱,即GlgA可能是鼠衣原体诱导小鼠输卵管积水病变过程中的重要致病因子。