该研究采用胰蛋白酶的特异抑制剂为配基,即对氨基苯甲脒和卵粘蛋白,合成了两种亲和超滤载体,以胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合物系为研究对象,分离纯化目标胰蛋白酶.由于二者的分子量相近,单独运用超滤的方法很难将二者完全分离开来,运用所合成的可溶性亲和载体,通过吸附目标分子、清洗杂蛋白、洗脱目标分子在超滤体系中获得纯化的胰蛋白酶.主要研究内容与结论如下:1.确定可溶性亲和超滤载体的制备工艺并对其结构进行表征采用200万的可溶性葡聚糖为载体,通过环氧氯丙烷活化,偶联胰蛋白酶的特异抑制剂为亲和配基,分别合成了两种可溶性亲和超滤载体,即对氨基苯甲脒亲和超滤载体和卵粘蛋白亲和超滤载体.确定了葡聚糖载体活化及其与两种配基偶联的条件,并对葡聚糖与环氧氯丙烷活化的反应历程进行分析.通过UV、IR、NMR的检测分析,研究载体、活化载体、亲和载体的结构差异及其内在联系,对两种亲和载体进行结构表征.得出活化的葡聚糖中含有活性基团,亲和配基已经连接到活化载体上.2.亲和超滤过程的研究对合成的两种亲和载体进行亲和超滤过程的研究,考察对胰蛋白酶的纯化效果.对吸附目标分子、清洗杂蛋白、洗脱目标分子的亲和超滤过程工艺进行研究,确定吸附、洗脱的条件.3.亲和载体的稳定性分析对所合成的两种亲和超滤载体的使用次数、储存时间、使用温度范围、使用的pH范围进行考察,并用热重分析技术考察亲和载体的热稳定性.4.研究亲和超滤过程的膜过滤特性主要研究亲和载体在静态、动态及动态电超滤情况下的超滤特性.从截留率和膜通量考虑,选择10万的PVDF超滤膜已能满足亲和超滤分离的要求.实验中使用的超滤膜污染轻,清洗后膜通量恢复率在87﹪以上,可以反复使用.通过对纯化亲和载体的PVDF10万超滤膜的电镜观察,清洗后的膜与新膜的表面状态相似,也从另一方面说明膜的污染程度较轻.