课题组前期以姜黄素（curcumin,Cur）、聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯（D-α-tocopheryl polyethylene glycol 1000 succinate,TPGS）、Pluronic P123（P123）、Pluronic F127（F127）为原料,制备了Cur/TPGS/P123/F127纳米混合胶束,研究发现所制备的胶束对Cur具有明显的增溶、缓释作用,且对肿瘤细胞有显著的抑制作用。本研究基于课题组的前期研究结果,结合胡椒碱（piperine,Pip）可抑制多种药物代谢和转运酶的活性,从而提高一些治疗药物和植物化学物质的生物利用度的特点,以及聚合物胶束（polymeric micelles,PM）具有的增溶、缓释、易于修饰等特点,以普朗尼克F127和P123为载体材料,制备了共同装载Cur及其联合佐剂Pip的复方聚合物胶束（Cur/Pip F127/P123-PM）。通过单因素考察与星点设计-效应面法实验优化得到Cur/Pip F127/P123-PM的最优处方。为了进一步增加对肿瘤细胞的主动靶向性,将叶酸（folate,Fa）分子修饰到载药复方胶束制剂得到Fa-Cur/Pip F127/P123-PM肿瘤靶向复方胶束制剂。主要研究方法及结果如下:1.建立测定胶束制剂中Cur含量的UPLC法采用Waters BEH C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）;PDA检测器;Empower3色谱工作站;检测波长:430 nm（Cur）、343 nm（Pip）;流动相为乙腈;流速0.15 m L?min^-1;柱温30℃;进样量1μL。在该条件下理论塔板数大于3000,分离度大于1.5。方法学考察结果显示,Cur与Pip分别在12.41～198.6μg?m L^-1和0.62～9.9μg?m L^-1范围内呈良好的线性关系,专属性、精密度、重复性、溶液稳定性和准确性良好,符合定量检测要求。该方法流动相组成简单,且具有快速、灵敏、重复性好等优点,可用于胶束制剂中Cur和Pip含量的测定。2.Cur/Pip F127/P123-PM的制备工艺优化以单因素实验结果为依据,进一步采用星点设计-效应面法优化制剂工艺。选取投药量、F127所占质量比、水化体积三个因素,每因素设5个水平。以Cur载药量、Cur包封率、Pip包封率以及胶束粒径为考察指标进行3因素,5水平的星点设计-效应面法实验,优选出的最终处方为:Cur与Pip的投药量分别为12.96 mg和0.69 mg、F127的质量比为0.46、水化体积为8.85 m L。该制剂的Cur平均载药量为5.63%、平均包封率为86.86%、Pip平均包封率为77.54%,实测值与预测值的误差均小于5%,实验预测性较好。3.冻干工艺的考察选用8%甘露醇为冻干保护剂,冻干粉外观无皱缩塌陷现象,呈现色泽均一的黄色,加入去离子水后能在1min内迅速溶解为透明溶液,24h内无沉淀析出。将各组冻干制剂复溶后胶束平均粒径稍有增加,而多分散指数PDI与Zeta电位绝对值几乎无变化。4.Cur/Pip F127/P123-PM的理化性质考察以上述最优处方制备胶束制剂,经考察,该制剂呈球形,分散均匀,平均粒径为66.79nm,电位接近于0m V。CMC值为4.07μg?m L^-1,具有较好的抗稀释能力。DSC结果显示Cur与Pip均以非晶体形式存在于胶束结构中。体外释放实验显示,胶束制剂在前24小时内释放较快,后释放速度减慢,与原料药的丙二醇溶液相比,具有明显的缓释作用。5.Fa-P123的合成及理化性质考察采用酯化反应合成靶向产物,并通过透析法提纯反应产物。紫外法测得Fa-P123在256nm、283nm与365nm的波长附近处有最大吸收,与Fa的紫外图谱相近;Fa-P123的红外光谱在1727cm^-1处出现ν_C=O,可以推断酯键的存在,证明酯化反应成功发生;与P123的¹H NMR光谱相比,Fa-P123的¹H NMR光谱中出现新峰,新峰归属于叶酸,可推断靶向化合物合成成功。紫外法测量得到反应的平均产率为35.53%。6.Fa-Cur/Pip F127/P123-PM的制备及表征同样以薄膜水化法制备靶向胶束制剂,该制剂的平均粒径约为70nm,分布范围较窄,Zeta电位绝对值约为10m V。CMC值为5.92μg?m L^-1。在Fa-Cur/Pip F127/P123-PM中,Cur与Pip仍以非晶体状态存在。靶向制剂对两药物的缓释效果稍优于非靶向制剂。96小时内对Cur与Pip的累计释放率分别为38.31%、63.20%。7.体外细胞实验MTT法测得Fa-Cur/Pip F127/P123-PM、Cur/Pip F127/P123-PM、Fa-Cur F127/P123-PM、Cur F127/P123-PM对Hct-8细胞的IC₅₀值分别为17.47±3.48μg?m L^-1、48.19±3.62μg?m L^-1、28.38±2.89μg?m L^-1、81.82±10.73μg?m L^-1。与相应不含Pip的Cur制剂对比发现,Pip能显著增强相应制剂对Hct-8细胞的抑制作用（p<0.05,p<0.01）;与相应非靶向Cur制剂对比发现,对制剂进行Fa修饰能显著增强相应制剂对Hct-8细胞的抑制作用（p<0.01,p<0.001）在体外荧光摄取实验中,Fa-Cur/Pip F127/P123-PM组的荧光强度最强,Hct-8细胞对Cur的摄取量最多,且在一定范围内具有时间和浓度依赖性。综上所述,本研究首先建立了测定Cur/Pip F127/P123-PM中Cur及Pip含量的UPLC法,并通过单因素实验和星点设计-效应面法实验优选出了Cur/Pip F127/P123-PM的最终处方。在合成靶向载体材料Fa-P123的基础上,进一步制备出Fa-Cur/Pip F127/P123-PM,该制剂在传统Cur胶束制剂的基础上综合佐剂Pip及Fa靶向的功能,能明显提高Cur对Hct-8细胞的抑制作用。