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已有研究表明,拟南芥转录因子bZIP19和bZIP23参与植物对锌缺乏响应的调节。我们的研究发现,bzip19, bzip23突变体对重金属铅的胁迫表现敏感,而bzip19bzip23双突变体对铅胁迫则表现更加敏感,且一个编码铅特异性运转的离子泵的基因PDR12转录水平显著降低,表明bZIP19和bZIP23可能发生相互作用调控下游靶基因PDR12。本论文在此基础上利用验证蛋白相互作用技术Yeast two-hybrid和GST pull-down assay对bZIP19和bZIP23转录因子的相互作用进行研究。研究结果如下: 1.拟南芥bZIP转录因子家族共有75个成员,是拟南芥中成员最多的一个基因家族之一。转录因子bZIP19和bZIP23,不管是在基因水平还是在蛋白水平,都具有很高的同源性。它们同属于F类bZIP转录因子,具有AtbZIP家族中F类转录因子典型的结构域,这进一步说明两者具有很高的同源性。 2.通过拟南芥网站( www.arabidopsis.org)数据库查询发现, bZIP19(AT4G35040)基因含有2个外显子和1个内含子,cDNA序列由1474个碱基组成,编码261个氨基酸。bZIP23(AT2G16770)基因含有2个外显子和1个内含子,cDNA序列由1424个碱基组成,编码249个氨基酸。物种间的基因同源性分析表明 bZIP19与bZIP23具有较高的保守性。 3.利用酵母双杂交技术对AtbZIP19和AtbZIP23蛋白是否具有相互作用进行研究。构建了pEG202-bZIP19、pEG202-bZIP23、pJG4-5-bZIP19与pJG4-5-bZIP23四个酵母双杂载体。结果显示,bZIP23转录因子具有自激活作用,而bZIP19转录因子没有自激活作用。在AtbZIP19作诱饵蛋白、AtbZIP23为靶蛋白时,检测到报告基因的表达,证实AtbZIP19和AtbZIP23之间存在相互作用。 4.进一步利用GST pull down assay技术对AtbZIP19和AtbZIP23蛋白是否具有相互作用进行研究。构建了pGEX-4T-1-bZIP19和pGEX-4T-1-bZIP19两个GST重组载体,进行了蛋白诱导和诱导条件的优化,确定融合蛋白表达条件添加0.5mmol/Lol/L的IPTG在30℃诱导1.0h。对GST融合蛋白进行了纯化,为下一步实验提供基础。 以上结果表明,bZIP19与bZIP23在基因和蛋白水平上具有很高的同源性,在物种间具有较高的保守性,而且两个转录因子具有相互作用。