研究背景在欧盟,肌营养不良症的发病率为1/2000,病情进展缓慢、致残率高、预后差,目前尚无有效的治疗手段,有关疾病诊断和治疗方面的研究显得尤为重要。抗肌萎缩蛋白(dystrophin)对维持肌纤维的结构完整性具有重要作用,dystrophin基因突变引起Duchenne型肌营养不良症(DMD)和Becker型肌营养不良症(BMD)。抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)是dystrophin的同源蛋白,两种蛋白结构高度相似,utrophin主要在再生肌纤维中表达并维持肌纤维结构的完整性,在成熟肌纤维中几乎全部被dystrophin替代,近年来通过动物实验发现utrophin在成熟肌纤维中的表达上调可能减少DMD患者肌纤维的损伤。神经元型一氧化氮合酶(n NOS)能产生一氧化氮(NO)增加骨骼肌运动中的血供,且在结构上与dystrophin关系密切相关,n NOS的异常表达可能与患者的运动不耐受症状有关。目前国内外关于dystrophin、utrophin和n NOS在不同类型肌营养不良症中的表达研究较少,该研究为明确上述3种蛋白在不同类型肌营养不良症中的表达情况为肌营养不良症的诊断、分型提供依据,并进一步了解3种蛋白表达与DMD患者病情严重程度的关系。探索dystrophin、utrophin和n NOS在不同类型肌营养不良症中的表达,进一步研究3种蛋白的表达水平与Duchenne型肌营养不良症(DMD)患者病情严重程度的关系,及DMD患者中dystrophin、n NOS和utrophin之间的表达关系。目的方法1.收集从2013年3月到2015年5月来我院就诊并诊断明确的DMD 26例、BMD7例、肢带型肌营养不良症(LGMD)10例、面肩肱型肌营养不良症(FSHD)5例、远端型肌营养不良症5例和强直性肌营养不良症(DM)11例。收集同时间段行肌肉活检病理结果正常者或急诊外伤患者作为对照组21例。利用免疫荧光方法检测3种蛋白在肌营养不良症患者和对照组中的表达水平并进行荧光强度分级,比较组间蛋白的表达水平。2.收集DMD患者病情严重程度指标:Hammersmith功能运动评分(HFMS),患者出现下述症状时的年龄:首发运动症状、上下楼梯困难、不能独立行走。根据dystrophin、n NOS的免疫荧光染色将DMD患者分为2组:完全缺失组和部分缺失组,根据utrophin的免疫荧光染色分为3组:正常阴性组、轻度增加组和明显增加组,比较组间患者病情严重程度指标的差异。3.用spearman秩相关分析DMD患者的dystrophin、utrophin和n NOS表达的相关性。结果1 3种蛋白在不同类型肌营养不良症中的表达与对照组相比,3种蛋白在LGMD、FSHD、远端型肌营养不良症和DM中的表达差异均无统计学意义;与对照组和其他类型肌营养不良症相比,DMD和BMD中的dystrophin和n NOS的表达均减少(P<0.002),utrophin的表达均增多(P<0.002),且DMD中dystrophin减少较BMD严重(P<0.002)。2 DMD患者中3种蛋白不同表达水平组间患者病情严重程度的分析Dystrophin和n NOS的2组间患者病情严重程度指标的差异均无统计学意义。utrophin的3组间比较:utrophin明显增加组患者出现上下楼梯困难和不能独立时的年龄较正常阴性组和轻度增加组晚(P<0.05),其他组间病情严重程度指标比较差异无统计学意义。3 DMD中3种蛋白的相关性相关分析结果:utrophin与dystrophin的表达呈负相关(r=-0.598,P<0.05),而n NOS与utrophin、dystrophin均无相关性。结论1.Dystrophin、utrophin和n NOS在DMD和BMD中表达异常,有助于为DMD和BMD的诊断和分型提供依据。2.DMD中utrophin的表达增加能延缓病情进展,而dystrophin和n NOS的表达对病情无明确影响。3.DMD患者中utrophin和dystrophin的表达呈负相关,提示dystrophin的表达减少可能反馈性引起utrophin的表达上调。