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本文以Doxycycline,TNFa单独或联合运用处理Saos-Xaf1诱导细胞,并用核浆分离技术分离抽提细胞核与细胞质。细胞总提取物检测显示XIAP的水平不受Xaf1表达的影响,也不受Xaf1和TNFa的协同作用影响。在Saos-2细胞中,XIAP抗体识别双条带,低位条带是XIAP,高位条带是非特异性杂带。对比细胞核与细胞质提取物检测结果,发现XIAP位于细胞质,而Xaf1则位于细胞核内。
本文用蛋白激酶分析法,检测Xaf1的表达是否影响TNFa活化的JNK/SAPK激酶的功能。TNFa处理细胞可引起激酶活性的短暂增高,在120分钟后活性降至基本水平。Xaf1的表达引起JNK/SAPK信号通路的轻微损伤。
本文将NF-3luciferase报告质粒转染入Xaf1诱导细胞中瞬时表达,经TNFa处理后,检测luciferase的活性来表示NF-kB诱导基因表达的活性。