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背景:狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)是影响系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者远期预后的重要因素。肾组织足细胞损伤是肾小球损伤的关键环节。足细胞结构或功能异常在狼疮肾炎发病中起重要作用。干扰素(Interferon,IFN)通路是SLE重要的致病通路。干扰素诱导基因(IFN induced gene,ISGs)IFIT1是Ⅰ型干扰素诱导基因家族中表达量最高的基因。已有研究发现SLE患者的外周血IFIT1表达升高,且在LN患者的肾组织中也观察到相同的升高。已有研究证明IFIT1过量表达能够增加炎性因子加重自身免疫,认为IFIT1表达水平升高可作为新的狼疮病情活动候选指标。那么当足细胞在IFIT1高水平表达的情况下,会出现哪些表型的改变?IFIT1是否参与了狼疮肾炎中足细胞的损伤?检索最新文献未见研究报道,这正是本研究关注的问题所在。如能探明干扰素诱导基因IFIT1与狼疮肾炎中足细胞损伤、滤过屏障破坏的关系,不仅有助于进一步完善SLE中Ⅰ型干扰素通路的致病机制,并做为治疗LN新的疾病特异性干预靶点。目的:研究Ⅰ型干扰素诱导基因IFIT1与狼疮肾炎中足细胞的损伤关系及机制。方法:分两部分进行研究。1.动物实验部分:18只雌性MRL/lpr小鼠(3、4、5月龄各6只)作为研究组,对照组为18只雌性BALB/c小鼠(3、4、5月龄各6只)。按不同月龄进行24小时尿蛋白定量分析,补体C3、C4和抗ds-DNA抗体测定。HE染色、PAS染色和透射电镜观察肾组织病理变化。免疫荧光(Immunofluorescence,IF)方法观察肾组织足细胞蛋白Nephrin、Podocin、F-actin、Synaptopodin与IFIT1表达,线性回归分析IFIT1和四种足细胞蛋白光密度之间的关联。2.细胞实验部分:慢病毒转染小鼠永生化足细胞建立过表达IFIT1小鼠足细胞,RT-PCR和Western blot检测IFIT1表达水平进行验证。CCK8法检测足细胞增殖,流式细胞仪检测足细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测Bcl-2、Bax、clevaed caspase3、p38、p-p38表达水平。基因芯片技术对过表达IFIT1损伤足细胞信号传导通路进行探索。结果:1.动物实验部分:MRL/lpr小鼠相比同月龄BALB/c小鼠24小时尿蛋白量(3B1.01±0.10 vs 3M 2.11±0.29,P<0.01;4B1.04±0.30 vs 4M3.56±0.26,P<0.01;5B0.99±0.24 vs 5M6.42±0.57,P<0.01)、抗ds-DNA抗体(3B37.65±1.75vs 3M125.93±7.50,P<0.01;4B38.62±3.17 vs 4M185.79±8.95,P<0.01;5B37.05±2.32 vs 5M208.39±21.16,P<0.01)显著升高;补体C3,3个月龄的BALB/c小鼠和MRL/lpr小鼠没有明显差异(3B98.86±15.92 vs 3M86.39±5.46,P>0.05),4和5个月龄时MRL/lpr小鼠对比BALB/c小鼠显著减少(4B103.50±16.55 vs4M78.42±3.26,P<0.01;5B101.73±18.93 vs 5M57.09±1.82,P<0.01);补体C4同月龄组MRL/lpr小鼠对比BALB/c组小鼠显著减少(3B26.23±4.58 vs 3M17.66±1.07,P<0.01;4B28.76±2.60 vs 4M15.31±0.47,P<0.01;5B28.76±3.51 vs 5M13.73±1.04,P<0.01)。HE染色和PAS染色,透射电镜观察肾脏病理改变,同月龄组MRL/lpr小鼠较BALB/c小鼠对比,病理改变随着月龄增加在不断进展。线性回归分析发现IFIT1光密度值与Nephrin、Podocin、F-actin呈负相关(P<0.05)。2.细胞实验部分:RT-PCR(转染组0.51±0.12 vs对照组0.24±0.03 P<0.01)和Western blot(转染组3.47±0.26 vs对照组0.83±0.04 P<0.05)验证成功建立过表达IFIT1小鼠足细胞。CCK-8检测发现对照组、空载组、IFIT1组吸光度24h(0.278±0.007vs 0.278±0.007 vs 0.240±0.006)、48h(0.358±0.010 vs 0.356±0.006 vs 0.262±0.008)、72h(0.482±0.011 vs 0.483±0.003 vs 0.287±0.009),IFIT1组显著低于对照组、空载组(P值均<0.01),过表达IFIT1可显著抑制小鼠足细胞增殖。流式细胞仪分析显示,对照组、空载组、IFIT1组足细胞凋亡率(3.47±0.68 vs 3.73±0.31vs 22.70±0.89),过表达IFIT1显著诱导足细胞凋亡(P值均<0.01)。WB检测发现过表达IFIT1组较对照组Bax(0.81±0.04 vs 0.57±0.01 P<0.01)、cleaved caspase3(0.64±0.02 vs 0.21±0.01 P<0.01)、p-p38/p38(0.88±0.04 vs 0.46±0.16P<0.05)表达水平显著升高,Bcl-2(0.51±0.10 vs 0.80±0.05 P<0.05)表达水平则显著降低。基因芯片技术检测对照组、空载组、IFIT1过表达组和增殖、凋亡有关基因F2R(4.54±0.80 vs 4.62±1.49 vs 8.11±0.68)和Eral1(9.10±1.50 vs 10.68±1.28 vs3.66±1.00),IFIT1过表达组较对照组、空载组分别显著性上调和下调(P值均<0.01)。结论:1.自发性狼疮鼠MRL/lpr中,表达增强的干扰素诱导基因IFIT1与维持正常的肾小球滤过功能必不可少的F-actin蛋白、Nephrin蛋白以及Podocin蛋白表达量负相关,可能参与了狼疮肾炎中足细胞的损伤,从而促进了蛋白尿的发生。2.IFIT1通过抑制足细胞增殖和促进凋亡使足细胞数目减少,肾小球滤过屏障破坏,肾功能损害。3.IFIT1可能通过F2R和Eral1信号传导途径,增加促凋亡蛋白Bax表达,激活Caspase3、p38,减少抑凋亡蛋白Bcl-2表达,最终使足细胞凋亡。