论文部分内容阅读
目的研究一种新型的医用生物材料—胶联羊膜的制备方法和保存条件、组织形态学、生物力学性能及体外细胞相容性探讨该新型医用材料用于眼表移植及组织修复的可行性和优越性。本研究分为四部分:一:胶联羊膜的制备及形态学观察二:胶联羊膜的生物力学性能评价三:胶联羊膜的体外细胞相容性研究四:胶联羊膜的保存条件初步研究方法一:经一定程序将羊膜和纤维蛋白胶粘合制备成胶联羊膜,取新鲜制备的胶联羊膜,大体观察,手术显微镜下观察,并行组织学切片,HE染色光镜观察并照相。二:随机选取制备好的12片胶联羊膜在电子万能试验机上进行一维拉伸性能测试,以同等数量的单层羊膜和双层羊膜作对照,得出抗拉强度、断裂伸长率、弹性模量及应力-应变曲线等。三:无菌条件下取新鲜兔眼球,剖取角膜上皮组织,以单层胶联羊膜为载体进行角膜上皮细胞的原代培养,倒置显微镜下观察不同阶段培养的细胞的形态,网格样目镜标记格观察不同时间的细胞生长覆盖面积,以去上皮羊膜为载体的细胞培养作对照。四:按照羊膜常规保存方法即无水丙三醇4℃保存胶联羊膜。取保存20d和40d的胶联羊膜,行大体观察、组织学切片HE染色观察形态变化,以新鲜制备的胶联羊膜为对照。取保存6月的单层胶联羊膜,扫描电镜下观察胶表面情况,以新鲜制备的胶联羊膜为对照。对无水丙三醇4℃保存1月的纤维蛋白胶的保存液测定其中蛋白浓度。结果一:大体观胶联羊膜的厚度明显增加,约为0.1-0.3㎜,胶联羊膜成一整体,手术显微镜下难以将其双层羊膜分开,组织切片示羊膜、纤维蛋白胶结构完整,羊膜与胶粘合紧密。双层胶联羊膜的粘合方式为羊膜的基底面贴基底面,单层胶联羊膜的粘合方式为羊膜的基底面贴纤维蛋白胶,游离的羊膜上皮面可见呈单层柱状排列的羊膜上皮细胞,羊膜基底面与胶间无明显空隙,未见羊膜皱缩,中间纤维蛋白厚度较均一,未见明显的纤维分层和纤维变性。二:胶联羊膜的抗拉强度为0.727±0.142Mpa;断裂伸长率为24.130±4.523%;弹性模量为1.283±0.482 Mpa;应力-应变曲线形态规则,重复性好。胶联羊膜的抗拉强度、断裂伸长率较单层羊膜和双层羊膜明显增加,胶联羊膜的弹性模量小于单层羊膜和双层羊膜(P<0.01)。三:角膜缘上皮细胞在胶联羊膜上黏附生长增殖,体外培养7d左右即形成单层上皮细胞。实验组与对照组(去上皮羊膜为载体)比较细胞生长覆盖面积第2d至第7d差异有显著性(P<0.05)。四:无水丙三醇4℃保存20d和40d的胶联羊膜较新鲜胶联羊膜稍薄,组织切片示羊膜有一定缩水,但羊膜与胶粘合紧密。保存6月的胶联羊膜外观完整,其纤维蛋白胶面的纤维网状结构较模糊;而新鲜制备的胶联羊膜纤维蛋白胶面可见突起的纤维网状结构。无水丙三醇4℃保存1月的纤维蛋白胶有部分降解。结论1、羊膜和纤维蛋白胶可结合并制成一种新型材料—胶联羊膜,该材料羊膜与胶粘合紧密,镜下形态规则。2、胶联羊膜复合材料具有良好的生物力学特性,其柔韧性和可塑性优于单层羊膜和双层羊膜。3、角膜上皮细胞在胶联羊膜上容易黏附、生长,胶联羊膜可作为上皮细胞种植的载体,但此方面还需进一步研究。4、无水丙三醇可用于保存胶联羊膜,但何种温度及条件下其保存效果最佳有待进一步研究。5、胶联羊膜可以作为眼表重建的材料,较之普通羊膜有优越性。