茶叶籽中黄酮类化合物的分离鉴定及其抗氧化活性研究

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:xiegui
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我国茶叶种植面积广泛,茶叶籽资源丰富,但目前利用率很低,因此研究开发茶叶籽这一资源宝库具有重要的意义。本文首次以茶叶籽为原料,研究茶叶籽中总黄酮的最佳提取条件,确定了大孔吸附树脂纯化茶叶籽黄酮粗提液的最佳工艺,分离鉴定了高纯度的茶叶籽黄酮单体,首次对该单体及其同系物柚皮素和柚皮苷的抗氧化活性及构效关系进行了研究。主要结果如下:1.建立了茶叶籽中总黄酮的提取工艺,在单因素试验基础上,选取液料比、提取温度和乙醇体积分数3个影响因素,以总黄酮含量为评价指标,通过Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法优化提取工艺,确定最佳提取条件为:液料比26:1(mL:g),乙醇体积分数58%,提取温度82。C,提取时间2h,在此条件下提取2次的总黄酮提取量为13.54mg/g。2.用大孔吸附树脂HPD826分离纯化茶叶籽总黄酮的粗提物,对影响HPD826树脂动态吸附、解吸的各因素进行了系统研究。最终确定最佳条件为:上样液浓度为1.8mg/mL,上样速度2mL/min,体积分数为50%的乙醇作为洗脱剂,洗脱剂流速为1mL/min。纯化后的茶叶籽黄酮纯度为40.81%,比纯化前提高了近8倍。通过HPLC-MS分析初步确定茶叶籽中四种黄酮的结构,分别为柚皮素-7-O-[β-D-吡喃木糖基(1→6)][p-D-葡萄糖基(1→3)-α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-α-L-鼠李糖基(1→2)-[β-D-吡喃木糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖基(1→3)-α-L-鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-β-D-吡喃木糖基(1→6)-p-D-葡萄糖苷。3.本章采用ODS柱和Sephadex LH-20首次分离纯化得到高纯度的茶叶籽黄酮单体,通过UV、IR、MS、NMR等方法鉴定其分子结构为柚皮素-7-O-[p-D-吡喃木糖基(1→6)][p-D-葡萄糖基(1→3)-α-L-鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。对化合物Ⅰ及其同系物柚皮素和柚皮苷的抗氧化活性进行了对比研究。结果表明,化合物Ⅰ在体外有一定的抗氧化能力,三种物质的抗氧化活性关系为柚皮素>柚皮苷>化合物Ⅰ,即黄酮苷元的抗氧化活性大于黄酮糖苷,黄酮二糖苷的抗氧化活性大于黄酮四糖苷。在柚皮素的同系物中,7位羟基糖苷化不利于其抗氧化活性,且抗氧化活性随糖基的增大而减小。
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