第一部分 兔连续性神经瘤模型的建立 目的 鉴于尚缺少连续性神经瘤损伤的哺乳类动物模型，本实验通过造成兔腓神经部分损伤，形成连续性神经瘤，为进一步研究提供模型基础。 方法 16只新西兰兔，取左后肢外侧切口，沿股二头肌纤维方向分离，暴露出从坐骨神经分出的胫神经、腓神经和腓肠神经。观测到腓神经与其深面的胫后动脉形成交叉，以此交叉为标志点向远端分离腓神经，可见腓神经分成内、外侧两束。剪开神经外膜，沿标志点以远切除腓神经外侧束一部分，造成15mm的缺损。术后3、4、5、6周各取2只兔子，暴露损伤侧腓神经，观察损伤段腓神经的大体改变，取损伤段神经组织切片行HE染色，观察形成神经瘤的时间。确定形成神经瘤后，切片进一步行luxol fast blue以及Van-Gieson染色。以建立损伤模型的8只兔子健侧作为对照行电生理检查，测定运动神经传导速度（MNCV）和复合肌肉动作电位（CMAP）。 结果 1．组织学结果：从3周起损伤的腓神经与周围组织粘连，4周时形成神经瘤样外观。经HE染色显示，4-5周时损伤断端的神经小束分散在粘液基质中，随着轴索的再生、扭曲，神经鞘细胞及纤维母细胞增生，形成由薄的纤维分割成的小团块组织，其内的细胞排列成编织状、漩涡状或流水状。6周时纤维组织透明变性，粘液及水肿样基质减少，形成与疤痕组织相似的外观。Van-Gieson染色后，神经瘤内胶原纤维呈红色，神经组织呈黄色。luxol fast blue染色后，神经瘤内胶原纤维呈红色，神经组织呈蓝色。2．电生理检测结果：健侧腓神经MNCV为59.77±9.35m／s，神经瘤侧MNCV为32.74±7.54m／s（p＜0.001），健侧CMAP波型正常、波幅为19.40±6.89mv，神经瘤侧波型离散、波幅降低为6.95±2.48mv（p＜0.01）；并在损伤侧胫前肌记录到运动单位电位失神经改变的正尖波和纤颤电位。 结论 腓神经部分损伤的方法可以有效地建立连续性神经瘤型神经损伤的模型，该模型稳定、实用，可以为治疗连续性神经瘤的实验研究提供模型基础。第二部分 兔连续性神经瘤型损伤的CNTF、CGRP表达变化的研究 目的 通过造成兔腓神经部分损伤，形成连续性神经瘤损伤模型，并测定与神经再生功能状态相关的睫状神经营养因子（CNTF）以及与神经病性疼痛相关的降钙素基因相关肽（CGRP）表达量的变化。 方法 6只兔一侧腓神经的部分束被切除，6周后建立连续性神经瘤型损伤模型。取健侧和神经瘤侧腓神经损伤远端到腓神经入胫前肌点前神经组织及L₇、S₁背根神经节各2mg，提取细胞RNA，去除基因组DNA，逆转录成CDNA，以Taqman探针荧光定量PCR法扩增目的基因，以GAPDH为看家基因。CNTF、CGRP和GAPDH扩增片断长度为80，101，和103bp。用iCycler软件分析荧光信号强度，以GAPDH为内参通过计算机得出目的基因的相对表达量。取健侧和神经瘤侧腓神经损伤远端到腓神经入胫前肌点前神经组织及L₇、S₁背根神经节各20mg，裂解细胞提取蛋白，SDS-PAGE电泳，转膜，封闭抗原，一抗过夜，二抗孵育，化学发光法显影，以β-actin为内参进行比较得出目的基因表达量的比率。 结果 1．Real-time QPCR：健侧CNTF mRNA的相对含量为1.28E+06±2.08E+05，神经瘤侧的含量为7.04E+05±8.56E+04（p＜0.05）。健侧CGRP的mRNA相对含量为8.76E+03±7.22E+02，神经瘤侧的含量为2.73E+04±7.30E+03（p＜0.05）。2．Western-blot：健侧CNTF的蛋白表达量与β—actin内参的比率为0.94±0.06，神经瘤侧的表达量与β—actin内参的比率为0.66±0.05（p＜0.01）。健侧CGRP的蛋白表达量与β—actin内参的比率为1.06±0.09，神经瘤侧的表达量与β—actin内参的比率为1.86±0.16（p＜0.01）。 结论 腓神经部分损伤形成连续性神经瘤后可引起CNTF、CGRP的表达量变化。 第三部分 神经旁路移植治疗连续性神经瘤的实验研究 目的 探讨神经旁路移植是否能促进连续性神经瘤型神经损伤的神经功能恢复，为临床治疗此类疾病提供实验基础。 方法 将建立模型的兔36只，随机分成3组：4周行神经旁路移植组（A组），6周行神经束间移植组（B组），对照组（C组）。20周后再将A、B、C组分成A₁、A₂，B₁、B₂，C₁、C₂组；每组6只。A₁、B₁、C₁组行肌电图检查后，取神经标本进行甲苯胺蓝染色，肌肉组织HE染色，用图像分析软件测量腓神经的有髓神经纤维数、有髓神经纤维截面积、胫前肌肌纤维截面积。电镜观测再生神经纤维及其靶器官结构改变。A₂、B₂、C₂组腓神经及背根神经节取材，行CNTF、CGRP的荧光定量PCR、Western-blot检测。 结果 1．电生理检测：与C₁组相比，A₁、B₁组MNCV、CMAP差异具有显著性（P＜0.05）；A₁、B₁组相比MNCV、CMAP差异具有显著性（P＜0.05）。A₁、B₁组胫前肌记录到多相、低幅的新生电位。2．腓神经有髓神经纤维计数：与C₁组相比，A₁、B₁组腓神经有髓神经纤维计数差异具有显著性（P＜0.001）；A₁、B₁组相比腓神经有髓神经纤维计数差异具有显著性（P＜0.001）。3．腓神经有髓神经纤维截面积：与C₁组相比，A₁、B₁组腓神经有髓神经纤维截面积差异具有显著性（P＜0.05），A₁、B₁组相比有髓神经纤维截面积无统计学差异。4．胫前肌的肌纤维截面积：与C₁组相比，A₁、B₁组胫前肌的肌纤维截面积差异具有显著性（P＜0.01），A₁、B₁组相比胫前肌的肌纤维截面积差异具有显著性（P＜0.05）。5．电镜结果：C₁组运动终板消失，胫前肌肌细胞萎缩明显，神经瘤远端部分轴索破坏，髓鞘变性、溶解。A₁、B₁组可见少量新生的运动终板。A₁组可见神经瘤远端新生的有髓神经纤维、无髓神经纤维，旁路移植神经内新生的神经纤维与变性的神经纤维共存。B₁组可见新生的有髓神经纤维，少部分纤维髓鞘板层达到正常厚度。6．Real-time QPCR：与C₂组相比，A₂、B₂组CNTFmRNA相对表达含量的差异具有显著性（P＜0.001）；A₂、B₂组相比CNTFmRNA相对表达含量的差异有显著性（P＜0.05）。与C₂组相比，A₂、B₂组CGRPmRNA相对表达含量的差异具有显著性（P＜0.001）：A₂、B₂组相比CGRPmRNA相对表达含量的差异有显著性（P＜0.05）。7．western-blot：与C₂组相比，A₂、B₂组CNTF的蛋白相对表达含量的差异具有显著性（P＜0.001）；A₂、B₂组相比CNTF蛋白相对表达含量的差异有显著性（P＜0.05）。与C₂组相比，A₂、B₂组CGRP的蛋白相对表达含量的差异具有显著性（P＜0.001）；A₂、B₂组相比CGRP蛋白相对表达含量的差异具有显著性（P＜0.05）。 结论 神经旁路移植可以促进连续性神经瘤型神经损伤后运动神经的功能恢复，减少与神经病性疼痛相关物质的表达。