猪链球菌病是养猪业中的一种重要传染病,临床上以脑膜炎、败血症和关节炎为主要特征,每年都会导致全球范围内的重大经济损失,给养猪业带来了巨大的挑战。猪链球菌可分为33种血清型(1～31、33和1/2),根据其不同毒力,它们可以分为高致病性,弱致病性(低致病性)和非致病性(无毒)菌株。通常,猪链球菌2型(SS2)被认为是毒力最强的血清型,在临床患病仔猪中分离率较高。而猪链球菌血清型9(SS9)也是分离率较高的血清型之一。目前还没有针对猪链球菌病有效的防控措施,市场上也没有针对SS9的商品化疫苗,而开发安全有效的疫苗是防治猪链球菌感染的有效策略。本研究主要为开发一种免疫效果良好的SS9灭活疫苗。试验获得的病原菌(CZ16A)分离自患病猪的扁桃体,利用该菌株制备的灭活疫苗能对小鼠和仔猪提供良好的保护力。本文从CZ16A菌株生物学特性及SS9灭活疫苗小鼠与仔猪免疫保护效力两个方面进行了系统的研究。1.CZ16A菌株生物学特性研究:本试验从常州某猪场患病猪扁桃体分离出一株主要致病菌,对该菌的血清型,革兰氏染色、毒力因子、生化反应、药敏反应、生长曲线、菌落形成单位(Colony-Forming Unit,CFU)与OD值之间的关系以及毒力等进行了研究。结果表明,通过gdh和cps9h双重PCR鉴定以及格兰氏染色鉴定该菌是猪链球菌9型,该菌毒力因子的表现型为 MRP-/EPF-和SLY+/FBPS+/GAPDH+/ORF+,在新鲜培养基中培养2 h就可进入对数期,培养至6h活菌数可达到2.85×109CFU。以斑马鱼为模型动物,分5个梯度,最高剂量以1.44×107CFU攻毒,计算得LD50为2.13×103CFU。以小鼠为模型动物,分5个梯度,最高剂量以5.6×108CFU攻毒,计算得LD50为9.55×105CFU。2.SS9CZ16A菌株灭活疫苗对小鼠及仔猪免疫保护效力研究:以6×108CFU剂量对断奶仔猪进行攻毒,仔猪没有出现死亡,但都表现出脑膜炎和关节炎等典型临床症状。经28。0C、0.4%甲醛灭活12 h后,加入Gel水佐剂,经无菌检验后制备成SS9灭活疫苗,对小鼠和仔猪进行免疫后进行攻毒,结果显示,小鼠经2×107CFU灭活疫苗免疫后,保护率达到了 80%。仔猪对照组都有不同程度的病变,最为严重的有一头心包严重黏连,脑膜有出血点,心脏和肝脏都有不同程度的出血点。免疫组有一头轻微脾脏黏连,其他病变不明显。说明本试验研制的灭活苗能够对仔猪产生一定的免疫保护力。本试验完成了对分离菌株CZ16A的生物学特性研究,以及利用该菌株制备灭活疫苗对感染小鼠和仔猪的免疫保护试验。本项研究为建立一个针对猪链球菌有效的防控体系打下基础,为大批量生产商品化疫苗提供科学依据。