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目的探讨藏药独一味对兔KOA模型软骨退变的保护或治疗机制,为临床独一味防治骨关节炎的推广应用提供理论支持。方法将40只新西兰大白兔随机编号,分为五组,即,(A)空白对照组、(B)模型对照组、(C)小剂量组治疗组、(D)中剂量组治疗组、(E)大剂量组治疗组,每组8只。A组作为空白对照组,行模拟手术。B、C、D、E组按Hulth方法,制造兔膝关节骨关节炎模型。术后1周开始全部实验动物每天驱赶行走30min,于造模1周后开始灌胃,各治疗组给药剂量根据Meeh-Rubner公式计算,将按体表面积折算的临床常用量等效剂量,溶于10mL蒸馏水中,独一味小剂量治疗组、中剂量治疗组和大剂量治疗组分别灌胃给予独一味胶囊60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg。每天灌胃给药一次；空白对照组、模型对照组于同一时间点给予等量生理盐水灌胃。治疗6周,末次给药后禁食12h。处死动物。再用组织学、免疫组化、RT-PCR学等技术对兔KOA模型关节软骨、关节液等部位进行检测和评估。切开实验侧兔膝关节,对兔膝关节关节软骨行大体观察并参照文献标准进行评分,比较各组间的差异；将关节软骨制作成普通光学显微镜切片进行观察,并按照Mankin’s关节软骨组织学评分系统进行评分,比较各组间的差异；制作透射电子显微镜切片,观察其超微病理变化。在切开膝关节之前抽取关节液,检测关节液中IL-1β、NO的含量变化,比较各组间的差异；应用RT-PCR技术检测药物治疗后,关节软骨MMP-3, MMP-13, TIMP-1mRNA表达的变化,比较各组间的差异；用免疫组化法分别测量关节软骨组织GAG含量、II型胶原阳性染色面积的变化,并比较各组间的差异；结果给药前后体重变化：与给药前动物体重相比较,各剂量治疗组在实验结束时体重均有不同程度的增加,但无统计学差异(均为P>0.05)。关节活动度：实验动物关节被动活动度测定结果显示,实验6周时,模型对照组与小剂量治疗组相比,P<0.05。各治疗组关节活动度均有不同程度的恢复,独一味中剂量、大剂量治疗组恢复程度尤为明显(P<0.01)。大体观察,中、大剂量治疗组与模型对照组比较,软骨磨损、退变程度明显减轻(P<0.01),光镜下观察,治疗组与模型对照组比较,Mankin’s评分明显降低,小剂量治疗组与模型对照组比较,P<0.05；中剂量、大剂量治疗组与模型对照组比较,P<0.01；电镜观察发现,药物治疗后中、大剂量治疗组关节软骨细胞的形态、结构、排列等均优于模型对照组。经不同剂量独一味治疗后,各组关节液中的NO、IL-1β含量均值相对于模型对照组有所降低,各治疗组间进行比较,中、大剂量治疗组关节液中NO、IL-1β含量与模型对照组比较明显降低,比较有显著性差异(P<0.01)。小剂量治疗组与模型对照组比较,经检验,P<0.05；提示随着独一味剂量的增大,关节液中NO、IL-1β含量进一步降低。治疗后,中、大剂量治疗组与模型对照组比较,中、大剂量治疗组MMP-3,MMP-13的mRNA表达较低、而TIMP-1的mRNA表达较高；模型对照组关节软骨中MMP-3,MMP-13的mRNA表达明显增高,而TIMP-1表达明显降低。组间比较有显著性差异(P<0.01)。II型胶原阳性染色后,模型对照组,阳性染色显著减少,分布不均匀,且表浅层出现缺损；经独一味胶囊治疗后,中、大剂量治疗组与模型对照组比较,中、大剂量治疗组II型胶原阳性染色面积明显增大,比较有显著性差异(P<0.01)。检测软骨基质中GAG含量,模型组与小剂量治疗组比较,软骨基质中GAG含量有显著性差异,P<0.05；中剂量组治疗组、高剂量组治疗组与模型组分别比较,中、高剂量治疗组软骨基质中GAG含量有显著性差异,P<0.01；结论1. Hulth手术方法建立家兔膝OA模型,稳定性好,成功率高,诱导周期较短,重复性好。2.独一味通过减少兔膝OA模型关节液中NO、IL-1β含量,抑制MMPs表达,增加TIMP-1表达,提高ECM中GAG含量,促进II型胶原的合成,延缓或一定程度上能够阻止兔膝OA病变过程的发展,进而改善兔膝OA关节功能。3.独一味胶囊对骨性关节炎的治疗机制可能与这几方面有关：在兔膝关节骨性关节炎模型上,经不同剂量独一味治疗后,能增加模型OA关节的关节活动度,减轻或延缓软骨退变、磨损程度和减少关节周围软骨性骨赘的增生,降低关节软骨光镜下的Mankin’s评分,中、高剂量治疗组表现尤为明显。应用独一味干预OA关节模型后,经检测关节液中的NO、IL-1β含量明显降低,表明独一味胶囊通过降低OA关节局部IL-1β、NO的水平,减轻关节滑液和滑膜的炎性反应,并呈现出一定的剂量依赖性。通过降低关节液中NO的含量,减少或延缓NO对关节软骨基质的破坏作用,减少软骨细胞的破坏,促进软骨细胞合成软骨基质,抑制或减少软骨细胞凋亡,使关节软骨的破坏减少。通过降低关节液中IL-1β的含量,调节软骨细胞的合成代谢,抵抗强大的促炎症作用,调节关节软骨分解代谢的影响；抑制或延缓骨关节炎进程。实验结果显示,空白对照组MMP-3、MMP-13的mRNA表达低于模型对照组,而治疗组中TIMP-1的mRNA表达高于模型对照组,进一步验证了OA与基质金属蛋白酶、金属蛋白酶抑制剂的调控密切相关。经不同剂量独一味治疗后的各组MMP-3、MMP-13的mRNA表达均值均明显少于模型对照组,提示独一味能抑制MMP-3、MMP-13在关节软骨组织中的表达,并呈现出一定的剂量依赖性,剂量越大,抑制作用越强。证明独一味胶囊能延缓骨性关节炎进程,起到延缓关节软骨基质的破坏、保护关节软骨的作用。藏药独一味可能是通过降低IL-1β等炎性细胞因子对软骨细胞的作用,减少MMPs的分泌,进而有效地促进了软骨细胞II型前胶原mRNA的表达,促进合成蛋白多糖和II型胶原,有效地防止了基质胶原的降解,一定程度上缓解了骨关节炎关节软骨的破坏进程,起到了一定的保护和修复作用。