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还原型谷胱甘肽(简称GSH)是机体内重要的活性物质,是许多酶反应的辅基,具有清除体内自由基、解毒等多种生理功能。本文对利用活性干酵母作为原料提取、纯化GSH进行了研究。首先研究了不同方法对活性干酵母细胞壁进行破壁所得到的含GSH的抽提液,确定采用化学渗透法抽提活性干酵母细胞中的GSH,用此方法从活性干酵母中抽提GSH目前未见文献报道。试验结果表明:化学渗透法抽提GSH的最佳条件为:10g活性干酵母加入一定比例去离子水调浆,用盐酸调至pH3,60℃恒温水浴加热2h,8000r/min离心15min,得GSH抽提液。在最佳抽提条件下,离心后清液中GSH的平均含量可达72.65mg/10g干酵母。且通过聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱分析得出,抽提液中不含有大分子物质,其对GSH的后续分离纯化工作非常有利。其次使用大孔树脂D001分离纯化GSH,用此方法从活性干酵母中分离纯化GSH目前未见文献报道。同时将其与005×7阳离子交换树脂分离纯化GSH作对比。大孔树脂D001分离纯化GSH的最佳条件为:pH4.5的0.02mol/L磷酸缓冲液(含10mmol/L NaCl)平衡,pH7.5的0.02mol/L磷酸缓冲液(含0.3mol/L NaCl)洗脱,洗脱流速为2.0ml/min。此法所得到的粗品颜色为白色,平均收得率为71.6%,含量为28.47%。005×7阳离子交换树脂法分离纯化GSH的最佳分离纯化条件:pH3.0上样,洗脱流速为2.4ml/min,0.5mol/L的NH4Cl溶液洗脱。此法所得粗品颜色为淡黄色,平均收得率为60.3%,含量为8.19%。因此,大孔树脂D001分离纯化GSH优于005×7阳离子交换树脂法。为了提高产品纯度,我们采用SephadexG-10凝胶过滤层析法对分离纯化所得的GSH粗品进行除盐、纯化。其最佳条件为:200mg产品/10mL去离子水上样,15%乙醇洗脱,流速为0.5mL/min。所得产品颜色为白色。采用HPLC法测定产品中GSH的含量,其含量为46.05%,按照中国药典2005年版的规定,对产品进行稳定性实验,确定其为低温、防潮、避光保存为好。