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目的：研究大理猪源旋毛虫成囊前期幼虫(Trichinela spiralis pre-encysted larva)三种抗原：排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens, ES)、表面抗原(surface antigens,SA)和虫体可溶性抗原(body soluble antigens, BSA)的蛋白组分及其之间的差异,分析其免疫原性和免疫反应性,为分离和筛选出免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫成囊前期幼虫抗原成分打基础。由于旋毛虫成囊前期幼虫比成囊期幼虫在宿主体内约早2周出现,宿主产生的抗成囊前期幼虫抗体出现也较早,可介导对成囊前期幼虫的杀伤作用,因此从成囊前期幼虫中寻找保护性抗原将是旋毛虫病免疫预防研究的一个发展方向。方法：(1)旋毛虫成囊前期幼虫的收集：20只成年大鼠,每只大鼠感染3000条旋毛虫成囊幼虫,分别于感染后14、15、16、17、18、19、20、21d将大鼠处死,用人工消化液消化肌肉收集旋毛虫成囊前期幼虫。(2)旋毛虫成囊前期幼虫抗原制备：将旋毛虫成囊前期幼虫在不含血清的RPMI-1640培养基中于5%CO2培养箱中37℃培养24h,离心、收集上清、透析、浓缩后得到排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens, ES);将旋毛虫成囊前期幼虫在含0.25%十六烷基三甲溴化铵(CTAB)及2%脱氧胆酸钠的RPMI-1640培养基中孵育2.5h,其间摇动培养瓶1次,离心、收集上清、透析、浓缩得到表面抗原(surface antigen, SA);将旋毛虫成囊前期幼虫反复冻融、研磨、超声粉碎、冷浸、离心,得到虫体可溶性抗原(body soluble antigens,BSA)。(3)免疫血清的制备：阴性血清的制备,SD大鼠感染旋毛虫之前尾静脉采血,制备阴性血清,-20℃冰箱保存备用。大鼠抗旋毛虫血清的制备,用旋毛虫成囊期幼虫经口感染SD大鼠(8×103条/只),从感染后第17d开始,尾静脉取血,用旋毛虫IgG抗体检测试剂盒检测感染旋毛虫大鼠血清IgG抗体效价。到感染后第20d检测得大鼠血清IgG抗体效价高达1：10240,即可于乙醚麻醉下经股动脉取血,室温静置30min,3×103r/min离心5min,取上清液即为大鼠抗旋毛虫血清,分装,-20℃冰箱保存备用。(4)旋毛虫成囊前期幼虫抗原保护性免疫的分析：分别用旋毛虫成囊前期幼虫虫体可溶性抗原、排泄分泌抗原、表面抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和阴性对照组,间隔7d共免疫3次。末次免疫后7 d,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口攻击感染。感染后7d和30 d检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数；用ELISA测血清中抗旋毛虫成囊前期幼虫IgG抗体。(5)旋毛虫成囊前期幼虫三种抗原的分析：以大理猪源旋毛虫成囊期幼虫的三种抗原(排泄分泌抗原、表面抗原和虫体可溶性抗原)作对照,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),分别对成囊前期幼虫三种抗原蛋白组分进行分析；采用蛋白印迹(Western-blot)对成囊前期幼虫抗原进行免疫反应性分析。结果：(1)旋毛虫成囊前期幼虫收集：旋毛虫感染后14、15、16 d大鼠膈肌均未见旋毛虫,17、18、19、20、21 d膈肌有旋毛虫的侵入并逐渐增多；17、18、19、20、21d平均每只大鼠分别收集5000、8000、10000、30000、30000条旋毛虫幼虫。(2)旋毛虫成囊前期幼虫抗原的保护性免疫：成囊前期幼虫虫体可溶性抗原、排泄分泌抗原、表面抗原和佐剂组的成虫减虫率分别为84.89%、89.73%、85.65%,2.57%；肌幼虫减虫率分别为71.71%、80.98%、73.66%,5.60%。排泄分泌抗原组、表面抗原组的成虫减虫率均高于虫体可溶性抗原组(p<0.05)。排泄分泌抗原组、表面抗原组的肌幼虫减虫率均高于虫体可溶性抗原组(P<0.01)。各免疫组小鼠血清IgG抗体滴度明显升高,虫体抗原组、排泄分泌抗原组和表面抗原组的几何平均倒数滴度分别为2798.89、3474.51、2984.83,分别是阴性对照组(459.32)的6.09、7.56、6.50倍。(3)旋毛虫成囊前期幼虫抗原的SDS-PAGE分析结果：以旋毛虫成囊期幼虫排泄分泌抗原、表面抗原和虫体可溶性抗原作对照,对旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原、表面抗原和虫体可溶性抗原经SDS-PAGE分析和考马斯亮蓝R-250染色后,可见旋毛虫成囊前期幼虫可溶性抗原显示20条蛋白染色条带,分子量范围在120kDa-14kDa之间,其中主带10条,分子量分别为100、67、55、47、45、43、39、37、35、30kDa；旋毛虫成囊期幼虫虫体可溶性抗原显示22条蛋白染色条带,分子量范围在120kDa-10kDa之间,其中主带14条,分子量分别为90、88、67、66、55、45、43、39、30、20、16、14、12、10kDa；旋毛虫成囊前期幼虫表面抗原显示9条蛋白染色条带,分子量范围在120kDa-20kDa之间,其中主带4条,分子量分别为119、40、39、35kDa；旋毛虫成囊期幼虫表面抗原显示11条蛋白染色条带,分子量范围在120kDa-10kDa之间,其中主带7条,分子量分别为119、63、55、45、39、20、13kDa旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原显示6条蛋白染色条带,分子量范围在45kDa-18kDa之间,其中主带3条,分子量分别为39、28、22kDa旋毛虫囊期幼虫排泄分泌抗原显示10条蛋白染色条带,分子量范围在70kDa-14kDa之间,其中主带8条,分子量分别为53、45、43、35、33、28、25、18kDa(图3)。(4)旋毛虫成囊前期幼虫抗原Western-blot检测结果：以大鼠抗旋毛虫血清检测时,旋毛虫成囊前期幼虫虫体可溶性抗原可出现5条反应条带,其中分子量为100、67、45、43、39kDa的条带着色明显；旋毛虫成囊期幼虫虫体可溶性抗原可出现5条反应条带,其中分子量为90、67、45、43、39kDa的条带着色明显；旋毛虫成囊前期幼虫表面抗原出现2条反应条带,其分子量分别为40、39kDa；旋毛虫成囊期幼虫表面抗原出现3条反应条带,分子量分别为63、55、45kDa；旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原显示1条反应带,其分子量为39kDa；旋毛虫成囊期幼虫排泄分泌抗原显示2条反应带,其分子量为45、43kDa(图4)。而阴性血清在相应位置均无特异性反应条带出现。结论：(1)感染后20 d左右是旋毛虫成囊前期幼虫收集的最佳时期,人工消化法可以收集成囊前期幼虫。(2)旋毛虫成囊前期幼虫虫体可溶性抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生抗攻击感染的保护力。成囊前期幼虫排泄分泌抗原显示出显著的免疫原性。(3)旋毛虫成囊前期幼虫虫体可溶性抗原中分子量为100、67、45、43、39 kDa的蛋白组分能与大鼠抗旋毛虫血清抗体IgG发生特异性识别。(4)旋毛虫成囊前期幼虫表面抗原中分子量为40、39kDa的蛋白组分能与大鼠抗旋毛虫血清抗体IgG发生特异性识别。(5)旋毛虫成囊前期幼虫排泄分泌抗原中分子量为39kDa蛋白组分能与大鼠抗旋毛虫血清抗体IgG发生特异性识别。