本研究采用mRNA差异显示技术分析了高温胁迫和鳗弧菌感染对栉孔扇贝基因表达的影响。克隆了栉孔扇贝色氨酸双加氧酶（TDO）,HSP70和肌球蛋白基因,并进行了表达分析。 采用3条锚定引物和8条随机引物组成24对引物组合,对高温胁迫前后栉孔扇贝基因表达变化进行了mRNA差异显示分析。在2599条扩增条带中,有59条差异条带,其中,9条在胁迫样本中特异扩增,20条只在对照样本中扩增,13条在胁迫样本中高水平扩增,17条在胁迫样本中低水平扩增。三种锚定引物H-T₁₁A,H-T₁₁C,H-T₁₁G的扩增条带总数分别为867条,865条和867条,而差异条带数占相应锚定引物总扩增条带数的比例分别为1.61%,1.84%和3.34%,特异条带数占相应锚定引物总扩增条带数的比例分别是:0.58%,0.81%和1.96%,H-T₁₁G均明显高于H-T₁₁A和H-T₁₁C。 同样利用mRNA差异显示技术,采用24对引物组合,分析了鳗弧菌应激前后栉孔扇贝基因表达的变化。共扩增得到2047条扩增条带,其中差异条带为32条。6条条带在胁迫样本中特异扩增,2条只在对照样本中扩增,9条在胁迫样本中高水平扩增,15条在胁迫样本中低水平扩增。三种锚定引物H-T₁₁A,H-T₁₁C,H-T₁₁G的扩增条带总数分别为755条,613条和679条,而差异条带数占相应锚定引物总扩增条带数的比例分别为1.10%,1.79%和1.91%。特异条带数占相应锚定引物总扩增条带数的比例分别是:0.26%,0.33%和0.59%,H-T₁₁G均高于H-T₁₁A和H-T₁₁C。 克隆了在鳗弧菌应激条件下,表达量减少的TDO基因片断,并利用5’RACE技术得到了基因全长。栉孔扇贝TDO基因全长1292 bp,编码383个氨基酸,分子量为44.8KD,等电点为6.35。编码的氨基酸序列与果蝇、人、斑马鱼、小鼠和线虫TDO的相似性分别为61%,57%,56%,55%和54%,并含有可能与TDO酶活性有关的保守性组氨酸。在大肠杆菌中表达了TDO-GST融合蛋白,并用融合蛋白制备了多克隆抗体。RT-PCR及Western blotting结果表明,栉孔扇贝TDO在鳃、消化腺、外套膜、闭壳肌、肾和性腺中都有表达。免疫组化分析显示,TDO