骨髓间充质干细胞移植联合甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ASky2009
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目的:本课题研究同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植联合应用甲基强的松龙(MP)对脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达和神经功能恢复的影响,为修复急性脊髓损伤提供理论依据。方法:3周龄清洁型SD(Spraque-Dawley)大鼠1只,体重约100g,处死后取材用密度梯度离心与贴壁法培养骨髓间充质干细胞;采用T10节段脊髓全横断方法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型100只,随机分成四组:A组为损伤对照(n=25),B组为MP组(n=25),C组为BMSCs组(n=25),D组为BMSCs联合MP组(n=25)。每组中取5只,在手术后1d、7d、14d、21d、28d,采用BBB(Basso,Beattle,Bresnahan)评分评价运动功能,然后取出脊髓组织采用免疫组化染色观察神经丝蛋白(neurofilaments,NF)表达。四组中其余大鼠于模型建立后3d、7d、14d、21d分成四个亚组,每个时间点5只大鼠。C、D组在大鼠损伤30min后,将体外培养的骨髓间充质干细胞用10ul微量注射器分别注入于脊髓两断端(每端两个注射点),B、D组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP,所有大鼠在相应时间点处死,取出脊髓组织行Nogo-A免疫组化检查,所得数据采用单因素方差分析,进行统计学处理,p<0.05具有统计学意义。结果:1、脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达呈现先升高后下降的趋势,Nogo-A蛋白表达的高峰出现在脊髓损伤后7d;2、MP组、BMSCs组、联合组较损伤对照组Nogo-A表达下降明显,BMSCs组较MP组表达下降明显,联合组表达下降更明显,各组相比具有统计学差异(P<0.05);3、脊髓损伤后双后肢瘫痪,行BBB评分,14d、21d、28d点MP组、BMSCs组、联合组较损伤对照组评分升高,BMSCs组评分高于MP组,联合组评分最高,各组相比具有统计学差异(P<0.05);4、NF免疫组化结果示联合组相对灰度值大于其它三组,各组相比具有统计学差异(P<0.05)。结论:1、应用BMSCs和MP可能通过影响Nogo-A、NF蛋白表达,促进轴突再生,对脊髓损伤起保护和修复作用。2、BMSCs和MP联合应用具有协同效应。
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