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本文研究的目的是为了在临床应用的药理活性物质中探寻逆转肿瘤耐药性的新药。重点研究了氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)及新型人重组肿瘤坏死因子rhTNF-NC对人红白血病耐阿霉素(Doxorubicin，Dox)细胞株K562／Dox及人乳癌耐阿霉素细胞株MCF—7／Dox多药耐药性(Multidrug resistance，MDR)的逆转及其机制。此外，还观察了中药提取物ZYY-6、新合成药LY980503的逆转作用及其机制。 应用MTT法及乳酸脱氢酶(LDH)法测定了细胞对0-20umol／L阿霉素(Dox)的敏感性。RT-PCR法分析Hal、rhTNF-NC、ZYY-6处理后MDR1、MRP和GST π，TopoⅡαmRNA表达的变化。通过流式细胞术观察0、6.25、12.5、25umol／L Hal对细胞内Dox蓄积和细胞周期进程的影响，同时也观察了rhTNF-NC对细胞内Dox蓄积的影响。应用MOAE荧光染料探针荷载细胞，通过日立F4500荧光分光光度计测定细胞荧光强度来检验Hal及rhTNF-NC对瘤细胞体积激活的氯离子通道的影响。应用Fura2／AM荧光探针染料(用于单层贴壁细胞MCF-7／Dox)及库尔特频道测定仪(用于悬浮细胞K562／Dox)测定了低渗环境下细胞的体积调节功能(Regulatory volume decrease，RVD)。此外，还观察了反义PKC。基因转染了耐药细胞后氯离子通道及细胞体积的变化。氟呱陡醇和新型人重组肿瘤坏死因子逆转肿瘤耐药机理的研究 第一部分实验证明Hai对K562/Dox的耐药性具有明显的逆转作用。在1 2.5、6.25及3.125umol/L时的逆转倍数分别为9.06、4.33及2.19。rh1NF一NC在500及500OLI/mL时也可逆转K562/Dox细胞对Dox的耐药性2.51与5.33倍。当Hal3.125umol/L及rhTNF一NC500u/mL联合应用时逆转作用可以相加，其逆转倍数在K562/Dox细胞可由单用时的2.19及2.51倍，增加到5.01倍;在MCF一7/DOX细胞中Hal和rh1NF一NC也表现出逆转耐药的作用，并且由两药单用时的2 .28及2 .18倍增至合用时的5.27倍。量一效曲线分析表明Hal及th1NF一NC可将耐药细胞的Dox浓度一效应曲线平行上移，与单用Dox比较P<0.01。 第二部分实验应用12.sulnol/L Hal处理耐药细胞K562/Dox3天后，其MDRI及M对的mRNA表达水平均呈现时间依赖性明显降低，分别较原水平下降76.29%及64.63%。GST，mRNA表达于药后d2下降66.06%，于d3回升。rhTNF一NC也表现相似的对MDRI，MRP及GST:mRNA的抑制作用，2500川mLthTNF处理K562/Dox细胞3天后MDRI、MRP、GST:可分别下降59.52%、65.52%及57.93%，rhTNF一NC还可使Topoll。基因由0.37士0.11升高077士0.07。当6.25umo比Hal与1000侧mL rhTNF一NC合用时，对MDRI的抑制作用呈现明显相加，由单用时的抑制率31.3%及33.17%升高为62.03%。ZYY一6也表现相似的抑制作用。FCM的检测结果表明Hal处理细胞th后，Dox在K562/Dox细胞内的蓄积量(以荧光强度表示)明显增加，并呈浓度依赖性。单用1.25或sumol/L Dox时的荧光强度分别为6 .67士1.31和20，12士5.67。当6，25、12.5或25 umol/L Hal与1‘25 umol/L的Dox合用时，荧光值可分别增加至10.01士2.05、一3.33士2.43及17.44士2.69，与5 umol/LDox合用时可分别增加至23.87士5.05、26.19士7.35和30.33士6.81。thTNF一C也表现类似的增加细胞内Dox蓄积的作用。5000u/m L th1NF一NC可使5 umol/L Dox引导的K562/Dox细胞的凋亡率由3.78士0.56%增加到6.89士0.12%(与单用Dox比较p<0.05)。此外，还发现Hal可明显增强Dox对K562/Dox细胞的GZ/M阻滞作用，而且这一增强作用呈现明显的量一效关系。3.125、12.5和25LImol/L Hal可使阻断在GZ/M期的细胞由单用sumol几Dox时的9.9士4.3%，上升至合用时的16.3士5.5%、23.4士3.0%及37.6士7.0%与单用时比较P<0.01。氟呱咙醇和新型人重组肿瘤坏死因子逆转肿瘤耐药机理的研究 第三部分:逆转耐药的药物影响P一gP的研究报告较多，但是国内外关于逆转药物对氯离子通道的作用的研究则报道极少。为此本文就Hal及th1NF一NC对瘤细胞体积激活的氯离子通道及细胞体积调节的抑制作用进行了研究，以期为氯离子通道在多药耐药中的作用提供新的信息。结果表明当细胞处于低渗环境时由于细胞体积调节性肿胀，从而激活了氯离子通道，导致部分细胞外氯离子进入细胞内，使部分MQAE荧光被淬灭，因而荧光值较等渗条件时降低34.46士5.91%。对照药TEA lmmol/L(完全性氯离子通道阻断剂)及10umol/L他莫昔芬(部分阻断剂)可以完全或部分抑制体积激活的氯离子通道，使进入细胞内的氯离子减少，故荧光值仅分别降低3.72士0.51及27.91士3.12%。6.25ura01/LHal、IOO0u/mLrh飞NF一C、SOug/mLZYY一6及ZOumol/L LY980503也均可抑制氯通道，其导致荧光值降低的幅度分别为24.43土3，25%、26、63料.98%、964士123%及15.72士2.19%。当Hal与rh1NF一NC合用时其抑制作用明显增强，合用时荧光值仅降低1 2.49士4.12%。二者单用与合用比较，相差非常显著(P<0.05)。 对细胞体积调节机能(RVD)影响的实验也获得了相似的结果。已知细胞的自身体积调节具有重要的生命意义，通过调节可以维持细胞体积的内环境稳定性，当细胞处于低渗环境时，由于水进入胞内细胞迅速肿胀，其后即使仍处于同样低渗条件下，?