电化学免疫传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用

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血吸虫病是一种分布广,种类多,危害性较为严重的病原体寄生虫病,目前检测血吸虫病的方法主要是传统的免疫分析法,但都需要较为复杂、昂贵的仪器及技术熟练的分析人员。同时因为灵敏度低,仅能用于简单的定性或半定量分析,不能完全适应目前血吸虫病防治工作的需要。为了血吸虫病的早期诊断、预防、治疗,开发研制一种灵敏、简便、快捷的检测方法具有较大意义。电化学免疫传感器本身所具有的灵敏、快速、低成本、低能耗等特点,被广泛应用于各种分子诊断中,主要包括核酸(包括DNA和RNA)的分子诊断、蛋白质的分子诊断和代谢物的分子诊断,并逐渐成为非常有潜力的检测技术之一。本论文探讨了电化学生物传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用。首先建立了一种新的电化学免疫传感方法,并将其应用于实际样本的检测。用辣根过氧化物酶(HRP)及新型底物邻-氨基苯酚(O-Aminophenol, O-AP)构建了基于“酶-邻氨基苯酚”体系的电化学免疫传感方法,并用于血吸虫抗体检测。邻-氨基苯酚在辣根过氧化物酶(HRP)催化双氧水(H2O2)时被氧化,生成的产物3-氨基吩噁嗪能通过电化学方法检测。实验结果验证了基于“酶-邻氨基苯酚”的新型蛋白检测体系检测人血清中血吸虫抗体的可操作性,实现了实际样本的检测。并且,采用方波伏安法作为最终检测方法,具有更高的灵敏性。随后设计了一种基于血吸虫抗体检测的多通量电化学免疫传感器。类似酶联免疫检测技术,将捕获探针抗原组装在电极上,待检物靶标蛋白和酶标二抗分别反应后,通过检测辣根过氧化物酶催化底物的氧化还原电流实现检测。本系统可以同时进行16个血清样本的检测。另外,这种快速、灵敏、省时、高效的血吸虫病诊断方法不仅实现了实际样本的检测,还为蛋白的检测创建了一个新的平台。
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