背景和目的：　　近些年，随着乳腺癌的治疗方式不断进步完善，治疗疗效有一定提高，但是乳腺癌的转移仍然是患者死亡的主要原因。肿瘤转移首先是肿瘤细胞脱离原发灶向周围正常组织浸润迁移，这些细胞被称为肿瘤芽，即浸润在肿瘤最前缘的孤立单个细胞或小细胞簇。并且证实，肿瘤芽在浸润前发生上皮间质转化（Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT），失去上皮细胞特性，获得了间质细胞特性。肿瘤芽在结肠癌、胰腺癌、鼻咽癌等中有不少研究，但在乳腺癌中的研究目前较少相关报道。另外，有人认为，肿瘤芽不仅具有间质细胞特性，还获得了干细胞特性，形成了具有更强迁移功能的肿瘤干细胞，进一步促进肿瘤转移。而肿瘤微环境在肿瘤的转移中所起作用也不可或缺。研究证实，在乳腺癌中，肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞分泌的趋化因子CCL18可促进乳腺癌发生EMT，进而促进浸润转移。然而，CCL18在促进乳腺癌EMT过程中是否也形成了具有更强迁移功能的肿瘤干细胞目前仍未见相关研究，因此，本课题我们通过研究在CCL18促进乳腺肿瘤芽EMT过程中肿瘤干细胞形成，进一步研究CCL18促进乳腺癌浸润转移的作用及机制，为寻找预防和治疗乳腺癌转移的治疗靶点提供基础依据。　　材料和方法：　　1、材料　　（1）临床资料收集2007年1月至2011年12月期间在广州医科大学附属第二医院诊治的76例浸润性乳腺癌患者，通过电话随访方式随访所有患者生存情况，随访时间至2012年12月截止。　　（2）石蜡切片标本、冰冻切片标本及新鲜无菌乳腺癌组织来源于广州医科大学附属第二医院病理科石蜡标本及手术室切下乳腺癌组织标本。　　（3）细胞株MCF-7、MDA-MB-231购自ATCC细胞库。　　（4）肿瘤抑制药物EriB、LIX-20、Ori、SCY-1、SCY-3、SCY-4、SCY-33由昆明植物研究所提供。　　2、方法　　（1）收集乳腺癌患者临床资料，观察乳腺癌H&E染色病理切片中肿瘤芽的情况并计数，分析乳腺肿瘤芽与患者预后的关系，并分析乳腺肿瘤芽数量与病理分级的关系。　　（2）乳腺癌冰冻切片通过H&E染色制作显微切割样本，用激光捕获显微切割系统（LCM）分别切割获取乳腺肿瘤芽及乳腺癌原发灶细胞，并分别提取目的细胞总 RNA，通过 qRT-PCR检测乳腺肿瘤芽与乳腺癌原发灶细胞 EMT标志物E-cadherin/Vimentin和乳腺癌干细胞标志物CD44/CD24、ALDH1表达水平，分析乳腺肿瘤芽的间质细胞特性与肿瘤干细胞特性。　　（3）通过乳腺癌组织块培养细胞迁移模拟肿瘤芽的发生，观察CCL18对培养组织细胞迁移的影响，并通过免疫荧光化学实验在激光共聚焦显微镜下鉴别迁移细胞，用HEA125标记乳腺癌细胞，α-SMA标记成纤维细胞；并检测组织培养中CCL18对迁移细胞的EMT标志物E-cadherin及肿瘤干细胞标志物ALDH1表达的影响。通过组织培养，分析CCL18在促进乳腺癌EMT过程中与乳腺癌干细胞的关系。　　（4）通过Transwell迁移实验模型中细胞迁移模拟肿瘤芽的发生，进行乳腺癌细胞MCF-7迁移实验，观察CCL18对乳腺癌细胞MCF-7迁移的影响，并通过免疫荧光化学在激光共聚焦显微镜下检测在CCL18作用下迁移到Transwell下室的细胞的EMT标志物E-cadherin/Vimentin及肿瘤干细胞标志物CD44/CD24的表达情况。通过细胞迁移实验，分析CCL18在促进乳腺癌细胞MCF-7 EMT过程中与乳腺癌干细胞的关系。　　（5）通过Transwell侵袭实验模型，进行乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭实验，观察在CCL18作用下，肿瘤抑制药物EriB、LIX-20、Ori、SCY-1、SCY-3、SCY-4、SCY-33对乳腺癌细胞株 MDA-MB-231侵袭的影响，分析肿瘤抑制药物对 CCL18促进乳腺癌侵袭的抑制作用。　　3、统计分析　　计量资料采用均数±标准差表示，采用t检验或秩和检验分析组间差异；计数资料采用百分比表示，采用Χ2检验分析组间差异；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Log-rank检验分析组间生存差异。所有数据采用SPSS17.0统计软件分析处理，检验水准p<0.05时表示差异具有统计学意义。　　研究结果：　　1．乳腺肿瘤芽与预后呈负相关。有乳腺肿瘤芽患者，预后越差。　　2．乳腺肿瘤芽数量与病理分级呈正相关，乳腺肿瘤芽数量越多，病理恶性程度越高。　　3．通过 RT-PCR检测发现，与乳腺癌原发灶相比，乳腺肿瘤芽 EMT标志物E-cadherin表达水平降低，Vimentin表达水平升高，差异均有统计学意义（P<0.001），说明肿瘤芽具有间质细胞特性；乳腺肿瘤芽中乳腺癌干细胞标志物CD24表达水平降低，而CD44、ALDH1表达水平升高，差异均具有统计学意义（P<0.001或P<0.05），说明乳腺肿瘤芽具有肿瘤干细胞特性。　　4．通过乳腺癌组织培养发现，CCL18促进乳腺癌组织培养细胞迁移，细胞迁移早、多且远：CCL18组细胞在培养第5天可见细胞迁移出，而对照组在第7天迁移出；培养第14天计数各组迁移细胞数发现，CCL18组迁移出的细胞数量较多（21.78±13.00），对照组较少（8.82±4.26），两组比较差异具有统计学意义（P<0.001）；并且CCL18组迁移细胞距组织块比对照组较远。说明CCL18促进组织培养细胞的迁移。　　5．组织培养后，通过免疫荧光化学检测发现：迁移出的乳腺癌细胞可用HEA125标记，在CCL18作用下，乳腺癌细胞EMT标志物E-cadherin表达降低，乳腺癌干细胞标志物ALDH1表达升高。说明CCL18在促进乳腺癌细胞EMT过程中，促进乳腺癌干细胞表型表达。　　6．通过Transwell迁移实验发现，CCL18促进乳腺癌细胞MCF-7迁移。经过免疫荧光化学检测发现，在CCL18作用下，迁移细胞EMT标志物E-cadherin表达降低，Vinmentin表达升高，具有间质细胞特性；其肿瘤干细胞标志物CD24表达降低，CD44表达升高，显示乳腺癌干细胞表型。说明CCL18在促进乳腺癌细胞MCF-7 EMT过程中形成具有更强迁移功能的肿瘤干细胞。　　7．通过Transwell侵袭实验发现，肿瘤抑制药物EriB、LIX-20、Ori、SCY-1、SCY-3、SCY-4、SCY-33能干预CCL18促进MDA-MB-231的侵袭作用。　　结论：　　1．乳腺肿瘤芽与预后呈负相关。　　2．乳腺肿瘤芽数量与病理分级呈正相关；肿瘤芽数量越多，病理恶性程度越高。　　3．在CCL18促进乳腺肿瘤芽发生EMT过程中形成了具有更强迁移功能的肿瘤干细胞。　　4．肿瘤抑制药物可以干预CCL18促进乳腺癌EMT的作用。　　背景和目的：　　肺癌是严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌（NSCLC)占肺癌80％以上，而肺腺癌发病率已超越鳞癌成为最常见的病理类型。肺腺癌脑转移的发生率高，严重影响患者生存。TKI类药物是ATP的类似物，可以竞争性与酪氨酸激酶结合，抑制激酶的激活，抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，达到治疗肺癌的目的；TKI类小分子化合物较易通过血脑屏障，治疗副作用小，易于长期维持治疗。本研究我们进一步研究TKI对脑转移肺腺癌患者疗效及预后优势。　　材料和方法：　　1、收集2009年1月-2013年6月期间在广州医科大学附属第二医院、第一医院收治的46例肺腺癌脑转移患者的临床资料。　　2、约每隔3月随访一次，并随访至2013年10月30日截止。　　3、所有数据采用SPSS17.0统计软件分析处理，检验水准p<0.05时表示具有统计学差异。　　研究结果：　　1、与用药前比，TKI组用药至6-15个月原发灶缩小差异具有统计学意义（P<0.05），疗效持续维持至15个月，用药至第9个月肿瘤缩小50%以上。　　2、用药第3-15个月，TKI组总缓解率（ORR=CR+PR）依次分别为33.3%、52.6%、42.9%、58.3%、75%，随用药时间延长总缓解率有明显增高，用药至第15个月总缓解率达最高。　　3、与化疗组比，用药至第3-9个月，TKI组原发灶大小未见统计学差异（P>0.05）。　　4、用药至第3-9个月，TKI组脑转移灶缩小与化疗组差异有统计学意义（P<0.05）。　　5、TKI组和化疗组的中位无疾病进展生存期（PFS）分别是11.9个月、7.1个月，中位总生存期(OS)分别是19.1个月、9.8个月，两组患者PFS及OS差异均有明显统计学意义（P<0.001）。　　结论：　　1、TKI抑制肺腺癌原发灶和脑转移灶的增大。　　2、TKI治疗肺腺癌脑转移疗效优于化疗。　　3、TKI使肺腺癌患者生存获益。