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抗菌药物在医学临床、养殖业等领域大量使用,使细菌的耐药性不断增加,多重耐药现象越来越严重,这给我们敲响了警钟,耐药性问题引起了各国的重视。大肠杆菌作为肠道重要的栖居菌之一,承受着不同药物的诱导和选择压力,导致大肠杆菌耐药性十分严重,使其也成为耐药基因储库和交换的重要场所。本次研究从不同地区采集食品动物(猪,牛,鸡)、宠物犬、大熊猫粪样以及大熊猫生活环境样本中分离、纯化和鉴定出588株大肠杆菌。依据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片法及结果判断标准,对所有分离的大肠杆菌菌株检测其对13种抗菌药物的耐药性。结果显示,588株大肠杆菌对13种抗菌药物呈不同水平的耐药性(耐药率在7.48-80.44%),其中对氨苄西林、四环素、氟苯尼考和复方新诺明呈很高耐药性(耐药率超过70%),而对左氧氟沙星,阿米卡星,头孢噻肟则呈较低耐药性(耐药率低于14%)。93.5%的菌株呈多重耐药性,多重耐药菌株主要为5-11耐。不同来源菌株耐药性比较发现,宠物犬源大肠杆菌对环丙沙星、氨苄西林、头孢噻肟和阿米卡星的耐药率极显著高于其他源菌株(P<0.01)；食品动物源菌株对氟苯尼考,链霉素,诺氟沙星,四环素、头孢曲松和氨曲南药物耐药率高于其他来源菌株,尤其对氟苯尼考,头孢曲松,氨曲南和复方新诺明的耐药率与其他源菌株有极显著差异性(P<0.01)；大熊猫粪源和环境源菌株对多数药物呈较低水平耐药(耐药率低于20.7%)。从588株大肠杆菌中随机选取320株,通过PCR法扩增其整合酶1型、2型和3型基因。结果显示,食品动物源菌株1类整合子检出率最高为69.70%(138株/198株),其中,猪源、鸡源和牛源分别为76.92%、71.79%和58.18%；犬源检出率为64.10%；大熊猫源和环境源检出率分别为50.75%和31.25%。2类整合子检测发现,2株猪源菌和2株鸡源菌同时检测出1型整合子和2型整合子；未检测出3类整合子。随机抽取145株1类整合子阳性菌,对其基因盒可变区进行PCR扩增和测序,结果显示：食品动物源、犬源、大熊猫粪源及环境源菌株基因盒检出率分别为91.36%、88.0%、58.82%和80.0%,检出的基因盒共有7种,基因盒基因排列分别为dfrA27、dfrA17、aadA2, dfrA1-orfC, dfrA27-aadA2, aacA4-aadA1-catB2和dfrA12-orfF-aadA2。对4株2类整合子阳性菌株基因盒可变区检测发现,有2种不同类型的基因盒,分别为dfrA1-sat2-aadA1(1株)和dfrA1-sat2(3株)。本次对食品动物源、犬源、大熊猫粪源和环境源大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒研究发现,不同源大肠杆菌对13种抗菌药物呈不同水平的耐药性,耐药性与菌株来源有关,其中犬源菌株耐药性最严重,其次是食品动物源,大熊猫粪源及其生活环境源菌株耐药性较低,耐药菌株呈多重耐药性：耐药菌株中广泛携带1类整合子,整合子-基因盒分子特征以介导氨基糖苷类和磺胺-甲氧苄啶类耐药的aadA和dfrA基因类型为主；菌株的耐药表型与其所携带的基因盒有一定的相关性。