乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染导致急慢性乙型肝炎,并与肝硬化及肝癌的发生发展有关。HBV基因组为环状部分双链DNA,包含四个开放读码框（Open reading frame,ORF）:P、C、S和X,其中X区编码HBx蛋白（Hepatitis B X protein）。HBx在病毒的复制和致病过程中发挥重要作用,但是HBx蛋白极不稳定,生成后在短时间内被快速降解。它主要通过泛素依赖-蛋白酶体途径和泛素非依赖-蛋白酶体途径发生降解,但其具体机制尚不完全清楚。MPND（MPN domain containing protein）属于去泛素化酶（Deubiqutinases,DUBs）中的JAMMs家族成员。JAMMs家族是去泛素化酶中唯一具有金属蛋白酶活性的家族,根据结构域不同可以分为JAMM/MPN+结构蛋白和MPN-结构蛋白,MPND属于前者。JAMM/MPN+结构蛋白是锌依赖的同肽酶,由JAMM组成的催化中心可以选择性水解泛素/泛素样蛋白和目标蛋白之间的泛素化修饰、或多聚泛素化链内的泛素单体之间的肽链。目前MPND的功能底物尚未清楚。本课题组前期通过GAL4 Matchmaker酵母双杂交系统筛选得知MPND和HBx在酵母菌株中存在相互作用,本研究旨在深入探讨MPND和HBx相互作用是否存在于哺乳动物细胞中、以及MPND和HBx相互作用对HBx的影响与可能的机制。本研究第一部分旨在进一步验证MPND和HBx在细胞内的相互作用。首先用免疫共沉淀法（Co-immunoprecipitation,Co-IP）验证MPND与HBx在哺乳动物细胞内具有相互作用。并用激光共聚焦验证MPND和HBx在细胞内可以共定位。同时用GAL4 Matchmaker酵母双杂交系统确定了MPND和HBx相互作用的结构域。本研究第二部分旨在探讨MPND过表达对HBx蛋白水平的影响。随着MPND表达量增加,HBx的蛋白水平也随之增加;研究结果还显示,与HBx结合的MPND结构域,即MPND的第272-349氨基酸同样具有使HBx蛋白水平增加的作用;最后检测了MPND过表达对HBV全基因组表达的HBx蛋白水平的影响,结果显示MPND蛋白过表达可以使HBV全基因表达的HBx蛋白水平增加。本研究第三部分旨在进一步探讨MPND抑制HBx降解的机制,以及对HBx反式激活能力的影响。加入蛋白酶体抑制剂MG132能逆转HBx的降解,而MPND过表达可以增强这个效果,但检测HBx的多聚泛素化水平发现其K48型多聚泛素化并未发生改变,提示MPND可能是通过非泛素化依赖的蛋白酶体途径抑制HBx的降解,并导致其蛋白水平增高。最后以双报告实验检测MPND对HBx反式激活功能的影响,结果显示MPND能显著增强HBx对NF-κB的转录激活活性。