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睾丸酮丛毛单胞菌含有降解甾核的关键酶3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD),通过包含许多酶的氧化甾核的复杂代谢途径,可以分解类固醇类物质。本研究采用单克隆抗体技术制备抗3α-HSD单克隆抗体,获得了高表达抗3α-HSD的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。主要方法是:将3α-HSD纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经过鉴定:其腹水效价分别为1×10~6、1×10~5、1×10~4。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的腹水单抗分别用辣根过氧化物酶(HRP)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记,制备酶标抗体和荧光抗体,并对该酶标抗体和荧光抗体进行鉴定。制备所得酶标抗体和荧光抗体具有特异性强、敏感性高的特点。我们应用本研究制备的酶标单克隆抗体建立了双抗体夹心ELISA方法,对采集的水源样品进行检测。结果表明,该单克隆抗体显示了对类固醇类物质的高特异性,为建立科学完善的环境激素检测方法奠定了基础。