形态学指标测量与脾破裂损伤时间推断的研究

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kingtigerzhang
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目的观察人外伤性脾破裂和大鼠脾锐器创损伤后不同时间形态学变化和分子指标表达的数量变化,寻求推断人脾破裂损伤时间的形态学方法和分子指标。方法收集安徽医科大学第一附属医院病理科2004~2013年因外伤致脾脏破裂行手术摘除的脾脏组织118例,筛选挑取蜡块,调取118例脾脏切除手术病历,按人脾脏受到机械性损伤致破裂到脾脏切除离体时间即脾破裂损伤时间分为<6h、6~12h、12-24h(1天)、24-48h(2天)、48~72h(3天)、72~120h(5天)、120~168h(7天)、168-240h(10天)、240~336h(14天)、≥336h(14天),共10组,以脾破裂出血边缘区为实验组,选取脾破裂病例切片中非出血区作为对照组;安徽医科大学实验动物中心提供健康成年SPF级SD大鼠35只,将大鼠随机分为7组,每组5只,其中6组为实验组,即根据大鼠脾锐器创造模时间到处死时间不同分为伤后1天、2天、4天、7天、10天、14天;1组为正常对照组,建立大鼠脾锐器创模型。HE染色分别观察人和大鼠脾破裂损伤中央区、纤维素渗出带和损伤外周区组织形态学变化;采用免疫组织化学和图像分析法检测人脾破裂损伤中央区、纤维素渗出带和损伤外周区MPO、CD68、α-SMA阳性细胞的数量变化;HE染色观察SD大鼠皮肤切创愈合过程中组织形态学变化,并在大鼠脾锐器创标本和大鼠皮肤切创标本中检测α-SMA的表达。结果本研究成功建立SD大鼠脾锐器创损伤的动物模型,人和大鼠脾破裂损伤组织形态学变化都经历炎症期、增生期、肉芽组织及瘢痕组织形成期,并通过形态学对比观察发现大鼠脾损伤后形态学变化和分子物质出现均早于人脾破裂标本,大鼠脾损伤后其愈合过程要比人类迅速。免疫组化标记显示人脾破裂标本MPO阳性细胞数在伤后6-12h组开始升高,12-24h组阳性细胞数最多,随后逐渐下降,0-5天相邻各损伤组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05);CD68阳性细胞数在伤后12-24h组开始升高,第7天阳性细胞数最高,之后开始下降,12-24h组以后相邻各损伤组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05);α-SMA在损伤24h之内在损伤中央区无阳性表达,第2天开始出现少量表达,随后依次升高,损伤24h后各损伤组之间差异均有统计学意义(P<0.05),7-10天、10-14天、≥14天三组α-SMA阳性细胞数虽逐渐增加,但其阳性强度似有减弱;大鼠脾锐器创标本伤后1天在损伤外周区可检测到少量α-SMA表达,伤后第7天表达α-SMA肌成纤维细胞数最多,阳性强度最大,随后两组阳性细胞数逐渐减少,阳性强度减弱。结论1.推断人脾破裂损伤时间应以脾实质内深部破裂出血区形态学变化为基础;2. MPO、CD68及α-SMA在人脾破裂损伤后组织中表达呈时序性改变;3.多指标综合应用结合脾破裂组织形态学改变有望更加精确推断人脾破裂损伤时间;4. α-SMA可用于人和大鼠脾脏组织损伤修复中后期时间推断的实用分子指标;5.SD大鼠脾锐器创损伤实验可作为大鼠脾损伤时间推断的一种实用动物模型。
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