苹果山梨醇脱氢酶的基因克隆及其组织和亚细胞定位

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a1986431230xinglixue
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
山梨醇是木本蔷薇科植物光合产物和光合同化物运输的主要形式。山梨醇脱氢酶(Sorbitoldehydrogenase,ECl.1.1.14)是苹果分解利用山梨醇的关键酶,在调节库强和细胞代谢中具有重要作用,与苹果果实的发育及品质、产量密切相关,山梨醇脱氢酶在苹果组织和细胞中的分布和亚细胞定位是了解山梨醇代谢问题的基础。 以新红星苹果(MalusDomesticaBorkhcv.Starkrimson)果实为试材,利用RT-PCR方法和RACE方法克隆了2个山梨醇脱氢酶同源基因AY849315和AY849316,各编码371个和368个氨基酸,其氨基酸和DNA的同源性分别为72%和58.8%。原核表达产物具有山梨醇脱氢酶催化活性,表明克隆的基因产物为山梨醇脱氢酶。根据抗原决定簇预测分析和生物学软件序列比对结果,各选取一段编码区序列,原核表达产物作为抗原制备抗体。Proteindotblot和Westernblot检测结果表明制备的抗体具有较高的反应灵敏度和特异性,而且两个抗体与两个原核表达的全长蛋白之间互相识别。RT-PCR和Westernblot分析发现,苹果果实、幼叶、种子(库器官)和成熟叶片(源器官)中都有山梨醇脱氢酶的转录和翻译产物。 利用免疫组织化学技术对苹果不同器官中山梨醇脱氢酶的分布情况进行了研究。发现苹果果实内山梨醇脱氢酶在维管组织(除导管分子外)和果肉细胞中都有分布。未完全展开的叶片内山梨醇脱氢酶主要分布在维管组织内,叶肉组织中基本没有此酶分布。已经伸展开的幼叶以及成熟叶片中维管组织和叶肉组织内都有山梨醇脱氢酶存在。 为了进一步确定山梨醇脱氢酶在不同组织细胞内的亚细胞定位情况,应用Westernblot和胶体金免疫电镜定位技术进行了研究。在苹果果肉细胞、维管薄壁细胞、伴胞等细胞内山梨醇脱氢酶主要位于细胞质内以及叶绿体中除淀粉粒之外的空间,在质膜、细胞壁以及线粒体、内质网等细胞器上则基本没有此酶的分布,并且伴随着苹果果实的发育,山梨醇脱氢酶的量增加。成熟叶片中山梨醇脱氢酶优先分布在叶绿体中淀粉粒之外的空间,细胞质内相对较少;在幼叶内则主要分布在细胞质内,叶绿体上相对较少,并且在液泡内的电子致密物上也有山梨醇脱氢酶的分布。在种子子叶细胞内山梨醇脱氢酶主要分布在粗面内质网的膜、粗面内质网腔、内质网断裂形成的小泡内以及蛋白质储存泡内。 对山梨醇脱氢酶在不同发育时期、不同组织器官的分布和亚细胞定位的研究结果表明苹果中山梨醇脱氢酶为一遍在蛋白,在苹果内广泛分布,但在不同组织器官内的作用位点存在差异,表明不同部位山梨醇的代谢位点和方式不同,为研究山梨醇脱氢酶的分子和细胞学机制,以及为进一步研究山梨醇在不同组织器官、不同发育时期的生物学功能提供了理论基础和实验依据。
其他文献
目的 调查深圳市南山区学龄前儿童冷执行功能特征,并探讨其家庭状况方面的影响因素.方法 采用分层整群随机抽样的方式在南山区心理筛查的托幼机构中随机抽取6所,对其3~5岁幼儿
草坪草在人类生活中的地位越来越重要,以至已形成一项方兴未艾的产业——草坪业,筛选与培育优良的草坪草品种是草坪业的重要任务。由于传统育种手段的局限性,运用先进的分子
近年来,荧光碳量子点因其在生物成像,标记,催化学等方面的应用而受到广泛关注。通过巧妙的结构设计,最大限度地简化合成步骤和后处理工序,制备具有较高光、电、热等物化性能、良好
目的 探讨影响早期先兆流产安胎结局的相关因素.方法 回顾性分析2016年1月-2018年12月在杭州市大江东医院接受治疗的120例早期先兆流产产妇的临床资料,依据其安胎结局将上述
摘要:转移经验能力是获取并实践思想方法的关键。在初中物理实验教学中,教师们要着力培养学生转移经验能力,侧重培养概括能力、联想能力和分析类化能力。文章从实验思想方法教育及其关键的贯穿其中的转移经验能力培养两方面来探索实验思想方法的有效转化。  关键词:物理实验;思想方法;转移经验;能力转化  科学思想方法对学生认知活动有指导、调控的作用。在初中物理实验教学中,要使学生领会实验思想方法。领会了思想方法
目的 探讨联合检测溶血三项和血清中总胆红素水平对由ABO-新生儿溶血病(HDN)引起高胆红素血症的早期诊断价值.方法 将2017年2月-2019年2月期间山西大同煤矿集团有限责任公司
摘要:在现代教育的引导下,我们的课堂上涌现出一批批高效的现代教育辅助工具,为提升教学效率和教学质量,发挥着重要的作用。其中,多媒体系统就是卓越的代表,能够引入更多的网络教学资源,提供高质量的教学。本文针对初中物理教学现状进行分析,提出在初中物理教学当中运用多媒体技术的方法,以供广大教师同仁借鉴参考。  关键词:初中物理;多媒体教学;开展策略  在传统的物理教学当中,多采用教师授课,学生记笔记,课后