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淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum(Thom)Samson)是一种典型的土壤及多种植物根系的习居菌,不仅可以寄生植物线虫的卵,而且还可以毒杀植物线虫幼虫。除此之外,淡紫紫孢菌还可以降解农药,促进植物生长。本论文主要以根癌农杆菌介导遗传转化为基础,建立淡紫紫孢菌T-DNA插入突变体库,通过对突变体表型变化的研究,筛选出对线虫卵及幼虫毒力变化的突变菌株。克隆分析了Zn(II)2Cys6转录调控因子和磷脂酶D基因与淡紫紫孢菌侵染和杀死线虫的关系。主要研究结果如下:(1)筛选出抗草丁膦基因bar和抗萎锈灵基因CBX,作为抗性标记,构建根癌农杆菌介导淡紫紫孢菌遗传转化体系。其转化条件为:抗性基因为编码抗草丁膦基因bar和抗萎锈灵基因CBX,淡紫紫孢菌Pl36-1孢子浓度为106孢子/m L,根癌农杆菌AGL-1的OD600值为0.2,共培养温度为25°C,共培养时间为54小时,乙酰丁香酮AS浓度为250μg/m L,摇床转速为120rpm/min。通过对丝核菌531菌株、拟松材线虫幼虫、根结线虫卵或幼虫等毒力测定,筛选出了359株表型变异的菌株。对突变体表型进行分析发现淡紫紫孢菌存在丰富的有益基因资源。(2)通过对耐不同浓度多菌灵的淡紫紫孢菌突变菌株β-tubulin基因克隆和突变位点分析,发现当β-tubulin基因第145(S),185(T)和200(F)氨基酸同时分别突变为A,A和Y时,淡紫紫孢菌耐多菌灵的浓度从0.3μg/m L提高到100μg/m L。生物学特性和致病性测定等试验表明β-tubulin基因位点的改变不会影响淡紫紫孢菌形态学特征和对线虫的毒力。同时大田试验结果表明β-tubulin基因具有稳定的抗性遗传,可以作为有效的选择标记基因。(3)白灰制菌素对线虫幼虫致死有明显的作用。通过对弱毒力菌株R147的T-DNA插入位点研究发现Zn(II)2Cys6转录调控蛋白rol P基因正向调控淡紫紫孢菌白灰制菌素A的合成,而对白灰制菌素B的合成有负调控作用。该基因在侵染线虫的早期过程中上调表达。rol P基因的表达受营养条件或环境因子的影响。当乳糖为碳源(或L-丙氨酸为氮源)时,m RNA相对表达量最高;同时p H值试验表明酸性环境更适合rol P基因表达。(4)以弱毒力菌株pt386为材料发现磷脂酶D不仅对线虫卵寄生有一定作用,而且对线虫幼虫致死也有重要作用。当磷脂酶D基因pld插入失活,导致淡紫紫孢菌对线虫的毒力减弱。克隆测序表明该基因含有两个HKD保守结构域。该基因主要在侵染线虫早期起降解线虫卵或幼虫表皮及细胞等作用。当碳源为麦芽糖或氮源为L-丙氨酸时,有利于pld基因的表达。同时,酸性环境(p H4-6)及温度在27-29℃时,pld基因的表达水平提高。(5)白灰制菌素D虽然对线虫毒杀作用不显著,但是对核盘菌有很强的拮抗抑制作用。通过对菌株pt361研究发现编码糖苷水解酶31的基因PGH31对白灰制菌素D有调控作用。室内及大田试验表明,淡紫紫孢菌菌株对核盘菌有抑制效果,同时可以促进油菜增产,是一种防治核盘菌的潜力生防因子。