肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7感染性腹泻已逐渐成为威胁人群健康的重要公共卫生问题。完善检测手段是进行该病流行病学调查以及疾病防控的关键问题之一。本研究以stx1、stx2、eae和filC为靶基因建立了EHEC O157:H7 Mul-PCR检测方法,同时优化了选择性增菌培养基,提高了检测的敏感性。进而装备成试剂盒,便于储存和应用。对各种模拟样品和100份肉牛粪便样品进行了检测,证明具有高度的敏感性和特异性。随后针对EHEC O157毒力基因的特异性片段,设计了引物和探针,建立了基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR检测方法,在定性检测的基础上,能够进一步测定检测样品目的菌的污染程度,评价风险强度。为进一步完善检测方法,本试验还建立了抗O157表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该细胞株分泌抗体特异性强,亲和力高,可用于EHEC O157免疫学检测方法的建立。以其建立的免疫磁性分离方法,用于样品的集菌,将PCR检测的敏感性提高了两个数量级。并用特异性单克隆抗体及兔抗O157多克隆抗体制备了EHEC O157胶体金免疫层析检测试纸条,敏感性为106CFU/mL。具有操作简便、快速、结果准确、易于判读的特点,可用于大量样品的检测。本研究形成一套系统的检测方法,为EHEC O157的流行病学研究及其疾病防控提供了坚实的技术支持。