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背景:皮肤的损伤修复是一个全球性的问题。近年来,已有大量证据表明脂肪组织来源的干细胞能加速皮肤的损伤修复,有些甚至都已经应用于临床治疗中。虽然脂肪组织来源的干细胞在修复和再生各种损伤组织方面有潜在的应用价值,但很少有研究涉及hADSC来源的外泌体对损伤修复的影响。而事实上干细胞发挥修复作用离不开它们的旁分泌作用,外泌体作为旁分泌的载体之一,是否也承担着相应的职责。本文希望能为外泌体加速伤口愈合的再生疗法提供最新证据。目的:初步探究人脂肪干细胞源外泌体对氧化应激损伤的表皮细胞迁移功能的影响。方法:首先我们从正常人抽脂手术获取的脂肪来分离脂肪干细胞,并扩增细胞,收集上清,采用超速和超滤结合的方法分离出外泌体。其次我们使用了透射电镜、纳米颗粒分析仪以及免疫印迹来鉴定分离出的外泌体。然后我们用共聚焦显微镜观察pkh26标记的外泌体能够被HaCat摄取,并利用100 μmol H2O2处理1h制备了 HaCat细胞轻中度损伤模型,以模拟皮肤创伤时氧化应激的生理状态,最后又通过功能实验进行验证,以观察脂肪干细胞来源的外泌体是否具有抗氧化应激和促进HaCat迁移的能力。结果:1、体外研究表明,来源于hADSCs细胞上清的纳米级囊泡TEM是直径60-80nm茶托样纳米囊泡,CD63、Alix和TSG101外体标志物阳性,DSL测量显示分离所得外泌体纯度为65.88%,具有外泌体的基本特征。2、体外HaCat氧化应激模型结果:CCK8法显示,0,50,100,200,250,300,400,500,600,800 μmol H2O2损伤处理HaCat细胞1h后,HaCat细胞存活率呈逐渐降低趋势(R=0.911,P<0.01)。H2O2会降低HaCat细胞活力,刺激细胞产生ROS信号,并进一步损伤细胞产生MDA,且呈剂量依赖性。3、分离的外泌体能被损伤后的HaCat细胞摄入,划痕实验结果显示HaCat细胞的12h划痕面积修复率:空白对照组、空白治疗组、损伤对照组、损伤治疗组修复率(%)分别是 40.26%±0.64%、69.57%±0.69%、32.28%±0.31%、69.62%±1.68%。损伤治疗组修复率(69.62%±1.68%)显著高于损伤对照组(32.28%±0.31%,t=37.847,P<0.015);Transwell实验所示:空白对照组、空白治疗组、损伤对照组、损伤治疗组10倍镜视野下迁移细胞平均数分别是20.85±4.837、44.8±5.237、14.95±2.584、40.05±7.660,损伤治疗组细胞迁移数目大于损伤对照组(t=13.88,P<0.01)。结论:通过体外实验,我们初步验证了 hADSCs-Exos在HaCat迁移中的治疗作用,为进一步明确hADSCs-exos在促进伤口愈合方面发挥重要作用提供证据。