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本研究通过控制不同光照时间(长光照组(18h)、短光照组(6h)、对照组(12h)和注射外源性褪黑素(低剂量组(10mg/kg)、高剂量组(20mg/kg)、对照组(0mg/kg))来改变鸡体内褪黑素的分泌量,利用经典血细胞计数法和流式细胞术对外周血白细胞数、红细胞数,T、B淋巴细胞及其亚群进行计数,RT-PCR技术对褪黑素3型受体(Mel1a、Mel1b、Mel1c)基因进行分子克隆与序列分析,同时原位杂交法检测在鸡的胸腺、脾脏、腔上囊中的mRNA表达规律。结果表明:采用经典血细胞计数法,发现随着光照时间的缩短,褪黑素分泌量的升高,鸡外周血中的白细胞数(P<0.01)、红细胞数(P<0.01)、血红蛋白含量均极显著升高(P<0.01);随着光照时间的延长,褪黑素分泌量的降低,鸡外周血中的白细胞数(P<0.01)、红细胞数(P<0.01)、血红蛋白含量(P<0.01)均极显著降低。采用流式细胞术检测T、B淋巴细胞及其亚群的消长规律,结果表明长光照组(18h)随Mel分泌量的降低,CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞和Bu-1a~+B细胞含量都明显降低,且与对照组相比,差异极显著(P<0.01);短光照组(6h)随Mel分泌量的升高,CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞和Bu-1a~+B细胞含量都明显升高,且与对照组相比,差异极显著(P<0.01)。注入外源性褪黑素后,CD4~+、CD8~+ T细胞和Bu-1a~+B细胞含量都有明显升高,且给药低剂量组与对照组相比显著升高(P<0.05),给药高剂量组与对照组相比极显著升高(P<0.01) (除Bu-1a~+ B细胞外)。根据GenBank登载的鸡褪黑素3型受体chickenU 31820(Mel1a)、chickenU 30609(Mel1b)、chickenU 31821(Mel1c)cDNA序列设计3对引物,采用RT-PCR技术从鸡脑组织中扩增出褪黑素3型受体的部分cDNA片段,长度分别为603bp、463bp和504bp,序列分析表明本试验所得鸡3型褪黑素受体cMel1a、cMel1b和cMel1c的核苷酸序列与GenBank中chickenU 31820(Mel1a)、chickenU 30609(Mel1b)、chickenU 31821(Mel1c)相对应部位的同源性非常高,分别为99.0%、97.2%和99.4%。采用地高辛分别标记鸡褪黑素3型受体基因制成cDNA探针,用原位杂交法检测Mel1a、Mel1b、Mel1c mRNA在鸡主要免疫器官(脾脏、胸腺和腔上囊)中的表达情况。结果表明:以上3种褪黑素受体亚型在鸡的脾脏、胸腺和腔上囊中均有表达,并且阳性信号多集中在上述器官中存在有T、B淋巴细胞的胞核和胞浆内,其分布规律为:18h光照组信号>12h光照组信号>6h光照组信号;在褪黑素受体3型之间进行比较发现阳性信号强弱为:Mel1a信号> Mel1c信号>Mel1b信号。