论文部分内容阅读
目的：建立SD大鼠酒精性脂肪肝(AFL)并肠源性内毒素血症(IETM)模型,并研究降脂消毒饮对AFL并IETM模型的治疗作用、保护作用及部分机制。方法：①建立AFL并IETM模型：模型组、乳果糖组依次以30%、40%、50%的酒精15ml·Kg-1·d-1按周递增灌胃,每日早晚分两次灌胃,同时给予5%的酒精为唯一饮料,自第3周乳果糖组增加乳果糖(1.35g·Kg-1·d-1)灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水,时间均为7周。并自第3周末开始每组各抽取6只,观察肝指数、血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清D乳酸(D-LAC)和二胺氧化酶(DAO)、血浆内毒素(LPS)、肝脏病理形态学指标。②降脂消毒饮对AFL并IETM模型的治疗作用、保护作用及量效关系：建立大鼠AFL并IETM动物模型。并分别在中断酒精刺激和继续酒精刺激的情况下,以降脂消毒饮半量(7.88g·kg-1·d-1),常量(15.75g·kg-1·d-1)、2倍量(31.5g·kg-1·d-1)、4倍量(63g·kg-1·d-1)、8倍量(126g·kg-1·-1)、护肝片(0.39g·kg-1·d-1),乳果糖(1.35g·Kg-1·d-1)进行干预。观察肝指数、血清AST和ALT、肝脏组织甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)、血浆LPS、肝脏病理形态学指标。③降脂消毒饮对AFL并IETM模型保护作用的机制：建立大鼠AFL并IETM模型。在继续酒精刺激的情况下,以降脂消毒饮4倍的剂量(63g·kg-1·d-1)进行干预。观察指标有血清AST和ALT、血浆LPS、血清D-LAC和DAO、白细胞分化抗原14(CD14)基因和蛋白表达、TOLL样受体4(TLR4)基因和蛋白表达、清道夫受体(SR)基因和蛋白表达、肝组织和血清白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-I0)、肿瘤坏死因子a (TNF-a)、γ干扰素(IFN-γ)。④降脂消毒饮对高脂饮食诱导的脂肪肝动物模型的治疗作用、保护作用：以高脂饲料喂养诱导大鼠脂肪肝动物模型,并分别在中断高脂饲料和继续高脂饲料喂养的情况下,以药物降脂消毒饮(15.75g·kg-1·d-1)、血脂康(0.14g·kg-1·d-1)、辛伐他汀(0.9mg·kg-1·d-1)进行干预。观察指标有肝指数、血清AST和ALT、肝脏组织和血清TG和TC、肝脏病理形态学指标。结果：①造模5周模型组各项指标符合AFL的要求,同时血浆LPS水平明显高于正常组(P<0.05),且模型组血浆LPS水平与肠黏膜通透性(血清D-LAC和DAO)、肝损伤程度(血清AST, ALT)表现一致。②治疗作用及量效关系：降脂消毒饮常量组各指标的改善总体上优于护肝片组、乳果糖组；2倍组、4倍组、8倍组的治疗作用优于其它组,而2倍组、4倍组、8倍组总体疗效相当；在不超过2倍剂量时,随着剂量增加,各指标也相应地改善。保护作用及量效关系：降脂消毒饮常量组各指标的改善总体上优于护肝片组、乳果糖组；4倍组、8倍组的保护作用优于其它组,4倍组、8倍组疗效相当；在8倍剂量范围内,随着降脂消毒饮剂量的增加,各指表也相应地改善。③模型组和4倍组血清D-LAC、DAO水平的变化与血浆LPS、血清AST和ALT水平变化一致；模型组和4倍组CD14、TLR4基因水平和蛋白表达、及IL-1、IL-6、IL-8、TNF-a、IFN-γ水平与血浆LPS、血清AST和ALT水平变化一致,而SR基因和蛋白表达及IL-10水平与血浆LPS、血清AST和ALT变化相反。④降脂消毒饮组对高脂饮食诱导的脂肪肝模型各指标的改善总体上优于血脂康组、辛伐他汀组。结论：①以上述方法5周可成功建立AFL并IETM动物模型；各种原因导致肠黏膜通透性的升高是血液中LPS升高的主因,IETM在酒精性肝损伤中可能具有重要作用；通过减少肠道对LPS的吸收,抑制血液中LPS的水平,可一定程度上抑制内毒素性肝损伤。②在中止酒精刺激和继续酒精刺激的情况下,降脂消毒饮对大鼠AFL并IETM都具有良好的疗效,中药复方降脂消毒饮有可能开发成为一种新型的治疗AFL并IETM和防止其进一步进展的有效药物；降脂消毒饮2倍剂量为治疗大鼠AFL并IETM的最佳剂量；降脂消毒饮4倍剂量为防止大鼠AFL并IETM的进展的最佳剂量；治疗作用量效关系：在不超过2倍剂量时,随着剂量增加,疗效也相应地增加,而2倍、4倍、8倍剂量疗效相当,无明显的量效关系；保护作用量效关系：在8倍剂量范围内,随着降脂消毒饮剂量的倍数增加,其疗效也相应的增加,但其疗效的增加并不呈倍数关系。③降脂消毒饮可以通过改善因酒精刺激造成的肠黏膜通透性改变,保持肠黏膜的完整性,从而抑制肠道LPS渗漏入血,改善LPS性肝损伤；降脂消毒饮上调SR基因和蛋白表达及抗炎因子IL-10水平,下调CD14、TLR4基因和蛋白表达,从而抑制LPS-TLR4信号通路中炎症因子的释放,改善LPS性肝损伤。④在中断高脂饲料和继续高脂饲料情况下,降脂消毒饮对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝模型都具有较明显的疗效；降脂消毒饮对酒精和高脂饮食复合因素诱导的脂肪肝模型可能同样有良好疗效。