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目的体外建立新生鼠NSCs缺氧模型，探讨锂对缺氧NSCs的修复作用，为临床应用锂治疗HIE提供实验依据。方法1.鼠NSCs分离培养及鉴定：生后24小时内SD大鼠脱颈处死，75%乙醇消毒，分离新生SD大鼠海马组织，投入冰浴的盛有D-hank’s液的平皿中，去除脑膜和血管，用眼科剪将组织尽可能剪碎，0.25%胰蛋白酶水浴箱消化，玻璃管吹打成细胞悬液，200目筛网过滤，离心，获得单细胞悬液，用无血清培养技术培养神经干细胞。免疫组织化学技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达；并用-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入试验，免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况；诱导神经干细胞分化，分别用神经元特异性稀醇化酶（NSE）抗体和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗体进行免疫组织化学技术鉴定分化细胞。2.体外NSCs缺氧模型的建立：即无糖培养基+低氧环境。无糖培养基采用与基础培养基成分相似的无糖DMEM培养基，低氧环境采用体积分数为5%CO2和95%N2的混合气体。细胞形态学观察、台盼蓝染色及cck-8检测法作为判断缺氧模型成功与否的标准。3.锂对缺氧NSCs的修复作用：缺氧后的NSCs中加入不同浓度的氯化锂共同培养，通过细胞形态学观察和cck-8检测法探讨氯化锂对缺氧NSCs的修复作用。结果1.鼠NSCs分离培养及鉴定：原代培养第1天可见分离的细胞呈圆形，遮光性强。原代培养3d，可见近球形的细胞团，结构松散，大小不均，5-7d可见细胞连接紧密，呈球形增大。传代后神经球生长较快，球体较均匀，背景干净。通过免疫细胞化学检测Nestin阳性表达证实为NSCs，BrdU阳性表达证实NSCs处于增殖状态。血清培养基诱导NSCs3d后，可见NSE染色阳性的神经元，胞体呈三角形，有1-2个突起。GFAP染色阳性的星形胶质细胞，胞体呈星形，突起粗短、较多分支。2.NSCs缺氧模型的建立：在DMEM无糖培养基和95%N2和5%CO2混合气体中培养1h后，缺氧组与正常组比较，细胞形态学改变：缺氧组NSCs数量减少，形态不规则，甚至出现破裂，形成絮状物或碎片；台盼蓝计数：缺氧组死亡细胞数量明显增多（P<0.05）；cck-8检测法：缺氧组NSCs活性明显降低（P<0.05），且与缺氧时间呈正相关。3．锂对缺氧后NSCs的修复作用：缺氧NSCs加入不同浓度的氯化锂后，同一时相点下锂干预组与缺氧组相比，细胞形态学观察：锂干预组NSCs数量多，折光性强；cck-8检测法：锂干预组NSCs活性明显高于缺氧组，3mM锂干预组NSCs活性高于1mM锂干预组（P<0.05）；免疫细胞化学检测：锂干预组NSCs增殖明显高于缺氧组。结论1.生后1d正常SD鼠海马在体外可以培养出NSCs。2.在无糖培养基和95%N2+5%CO2条件下缺氧1h可以建立NSCs缺氧模型。3.氯化锂增加缺氧后NSCs细胞活力。4.氯化锂促进缺氧后NSCs的增殖。5.氯化锂对缺氧后NSCs的修复作用在一定范围内呈剂量依赖性。6.氯化锂有希望成为临床治疗HIE的新药。