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研究背景:ECDI诱导的早期凋亡细胞已经被作为有效且低毒性的免疫抑制方法应用于治疗自身免疫疾病的临床研究,且在小鼠体内,可诱导胰岛移植供体特异性免疫耐受形成,并且明显延长同种异体心脏及皮片移植的存活时间。但与此同时,ECDI诱导的供体早期凋亡细胞相关免疫抑制机制仍不完全清楚。而M2型巨噬细胞作为非特异性免疫系统成员,在抑制炎症反应,免疫抑制反应中扮演重要的作用。研究目的:探索了供体ECDI-SPs与受体巨噬细胞极化方向的关系,揭示供体ECDI-SPs延长移植物存活时间的相关机制,为此方法进一步的临床治疗应用提供了相应理论基础。研究方法:利用受体小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)与供体小鼠ECDI-SPs体外共培养体系,首先通过流式细胞术,对受体巨噬细胞吞噬ECDI诱导的供体脾脏单个核细胞的吞噬情况进行了检测,并进一步通过共培养体系,利用流式细胞术、RT-PCR以及Western Blot等技术对吞噬后受体巨噬细胞的极化方向、IL-10、IL-6等相关细胞因子的表达以及吞噬后极化方向改变的相应分子机制进行了检测。建立受体小鼠诱导极化后巨噬细胞与脾脏单个核细胞共培养体系,观察极化后巨噬细胞对Treg细胞比例的影响。建立C57/BL6-Balb/c小鼠同种异体皮片移植模型,检测在体情况下受体小鼠接受供体ECDI-SPs注射后,Mφ的极化方向与体外培养是否一致,同时检测Treg比例,同时利用Luminex技术对小鼠血清相关炎症及抑炎分子进行检测。研究结果:受体小鼠Mφ可明确吞噬ECDI处理后供体小鼠脾脏细胞,且吞噬后向M2方向极化,与吞噬未经处理的供体脾脏细胞极化方向截然相反。吞噬ECDI-SPs后受体Mφ的IL-10分子表达显著上调,同时IL-6等炎症因子表达受到抑制。受体小鼠Mφ吞噬ECDI-SPs后,通过增强CREB的磷酸化,促进其自身向M2表型极化。诱导极化为M2型的巨噬细胞可进一步促进Treg细胞比例的上升。在体皮片移植模型情况下,与对照组相比,ECDI-SPs的注射同样可促进受体小鼠体内Mφ向M2型极化,且明显提高了Treg细胞比例,且排斥终点血清IL-10明显升高,同时IL-6、IL-12p70、IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平明显降低,最终延长了移植皮片的存活时间。研究结论:Mφ在吞噬同种异体ECDI处理的早期凋亡细胞后,通过增强CREB磷酸化,促进自身向M2方向极化,促进IL-10的分泌,抑制IL-6的生成,进一步提升Treg比例,调控移植排斥反应,延长移植物存活时间。