rhNDPK-A蛋白结构特征研究及若干免疫学作用初探

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目的:通过对重组人rhNDPK-A的蛋白结构及生物学特性的研究,为进一步研究其生物学功能提供理论基础,探讨rhNDPK-A蛋白对免疫细胞的作用,为深入研究rhNDPK-A蛋白对免疫系统的作用机理提供理论基础。 方法:在纯化rhNDPK-A蛋白的基础上,对其单体分子量、酶活性、蛋白纯度及聚集体分子量进行了测定,聚集体分子量的测定采用了HPLC和多角激光仪,并用原子力显微镜对rhNDPK-A聚集体的外部形貌进行了观察。rhNDPK-A蛋白体外作用于正常小鼠的脾细胞,用MTT法测定了rhNDPK-A蛋白对小鼠脾细胞存活的影响以及对有丝分裂原诱导的脾细胞增殖的协同作用,用流式细胞仪测定了rhNDPK-A蛋白对脾细胞的细胞周期的影响。以纯化得到的rhNDPK-A蛋白免疫新西兰兔,蛋白免疫印迹实验鉴定了兔抗血清的特异性。 结果:1.纯化所得到的rhNDPK-A蛋白主要是以六聚体的形式存在;2.rhNDPK-A蛋白体外作用,可直接促进小鼠的脾细胞存活,并对PHA、ConA诱导的脾细胞增殖有协同作用;3.rhNDPK-A蛋白可明显改变脾细胞的细胞周期。3.免疫得到的兔抗血清具有较好的特异性。4.ELISA法检测所制备的抗体的反应效价为:1:800,western blotting试验结果证实,该抗血清具备较好的特异性,能与rhNDPK-A蛋白发生反应, 结论:rhNDPK-A蛋白可能主要以六聚体形式存在,直接观察的蛋白结构与文献报道的X衍射结果相似;rhNDPK-A蛋白对正常小鼠的脾细胞的存活有促进作用,推测很可能以信号转导的方式调控细胞周期从而达到对细胞生长的调节作用。
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